Question

【题目】土壤中含有多种微生物，某研究小组欲分离能在Fe2+污染的土壤环境下生存的希瓦氏菌；进行了相关研究。回答下列问题：

（l）配制培养基：加入牛肉膏、蛋白胨、琼脂、NaCI、H2O及________等并灭菌；该培养基按功能划分，属于_______培养基。

（2）分离希瓦氏菌：将10 g土样溶于90 mL蒸馏水中，再稀释成多个倍数，取多个稀释倍数的土壤样品液0．1mL分别接种到多个平板上，这样做的目的是____；培养一段时间后，A、B研究员在105稀释倍数下得到的结果：A涂布4个平板，统计的菌落数分别是150、178、259、310;B涂布4个平板，统计的菌落数分别是152、165、175、184，则每克土壤样品中的希瓦氏菌数量最可能为________个。

（3）进一步纯化希瓦氏菌：采用平板划线法接种培养一段时间后，发现第一划线区域上都不间断地长满了菌落，第二划线区域上几乎无菌落，分析出现此现象的原因可能是________（答出两点）。

（4）研究人员还欲采用测定ATP含量的方法估算希瓦氏菌数，该方法的依据是____________，此方法与显微镜直接计数相比，得到的希瓦氏菌数目________（填“多”或“少”），原因是____________。

Answer 1

【答案】含高浓度的溶液 选择 为了获得菌落数量合适的平板，排除偶然因素造成的误差 接种环灼烧后未冷却就划线；未从第一区域末端开始划线 活细胞都能产生ATP，因此可用于估算数目 少 显微镜直接计数统计中包括死细胞和活细胞

【解析】

1、微生物的营养包括碳源、氮源、水和无机盐，有些微生物还需要其他特殊的营养物质；

2、常用的平板接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法。

（1）本实验目的是分离能在Fe2+污染的土壤环境下生存的希瓦氏菌，所以在培养基中添加含高浓度Fe2+的溶液；这属于选择培养基。

（2）取多个稀释倍数的土壤样品液0．1mL分别接种到多个平板上，这样做的目的是为了获得菌落数量合适的平板，排除偶然因素造成的误差；对微生物进行计数需要选择30-300的菌落数目的平板进行计数，计算公式为,所以每克数目为个。

（3）第一划线区域上都不 间断地长满了菌落，第二划线区域上几乎无菌落，可能是因为接种环灼烧后未冷却就划线（将菌种全部杀死）；未从第一区域末端开始划线（未接种菌种）。

（4）活细胞都需要ATP提供能量，所以可以采用测定ATP含量的方法估算希瓦氏菌数；由于死的细菌不能不能产生ATP，显微镜直接计数统计中包括死细胞和活细胞，所以该方法得到的希瓦氏菌数目少。