Question

【题目】检验水中的细菌、病毒的含量是有效监控部分疾病发生的必要措施，某学习小组为了调查某河流的水质情况，测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作，请回答下列有关的问题：

(1)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，一般需要配制含有____、水、无机盐的固体培养基，在划线时，接种环通过______灭菌。划线的某个平板培养后，第一划线区域都不间断地长满了菌，第二区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成划线无菌落可能的操作失误有①_____________；②________________。

(2)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布平板时，滴加到培养基表面的稀释液量不宜过多的原因是_______________。将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.2mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为62、64和66。据此可得出每升水样中的活菌数为______。

(3)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液的________的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。

Answer 1

【答案】碳源、氮源 灼烧 ①第二次划线前接种环灼烧后未冷却 ②划线未从第一区域末端开始 培养基表面出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果 3. 2×l07个 溶解氧 营养物质

【解析】

1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的基本过程为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板五个步骤。

2、微生物常见的接种的方法：

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

3、划线分离操作中的有关问题：

①在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。

	第一次灼烧	每次划线之前灼烧	划线结束灼烧
目的	避免接种环上可能存在的微生物污染培养基	杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种	杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染或感染操作者

②在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种。

③在进行第二次以及其后的划线操作时'要从上一次划线的末端开始划线。每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

（1）培养基的成分一般包括：水、无机盐、碳源和氮源，有的微生物还需要添加生长因子。微生物的接种方法可以采用平板划线法进行接种，接种时接种环需要灼烧灭菌处理。在划线接种时，在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。因此如果划线的某个平板培养后，第一划线区域都不间断地长满了菌，第二区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成划线无菌落可能的操作失误有①第二次划线前接种环灼烧后未冷却；②划线未从第一区域末端开始。

（2）稀释涂布平板法操作时，滴加到培养基表面的稀释液量如果过多，会导致培养基表面出现积液，引起菌体堆积，影响分离效果。将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.2mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为62、64和66，据此可得出每升水样中的活菌数为（62+64+66）÷3×100×（1÷0.2）×1000=3.2×107个。

（3）振荡培养能提高培养液的溶解氧的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。