题目内容
【题目】某研究小组欲对比人手上不同部位微生物的分布情况。实验步骤如下:
①准备工作:配置培养基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、.X、H2O) ,制作无菌平板。
②采样:分别用蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的手掌、手指、手背3个部位,擦完后,将手接触部分剪去,将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检。
③检测:将上述样液充分振摇,将无菌吸管分别吸取1ml待检样液接种于无菌平板;将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间,统计各组平板上菌落的平均数。
回答下列问题:
(1)该培养基中微生物所需的碳源是_________。该培养基中的成分X通常是_________________。配制培养基的基本步骤是计算—称量—溶化—__________—倒平板。
(2)若培养得到的菌落数目偏多,难以统计,应在第3步增加___________步骤。
(3)某同学在统计某一实验组的3个平板菌落时,发现一个平板所得数据和另外两个偏差较大,在做原始记录时对该数据应___________(选填下列选项前的字母)。
A.舍弃 B.修改 C.如实填写
为了检验该组相关数据的可靠性,还应_________________________。
(4)正是因为人手上有很多细菌,因此微生物的实验室培养过程中,通常用75%的酒精对手进行消毒,而不用95%的酒精,其原因是___________________________。
【答案】牛肉膏、蛋白胨 琼脂 灭菌 梯度稀释 C 重复实验 酒精能使蛋白质变性,但95%酒精浓度过高,会使细菌周围形成一层由凝固蛋白质组成的保护膜,使酒精分子不能进入细菌,达不到杀死细菌的作用
【解析】
统计菌落数目的方法:
(1)显微镜直接计数法
①原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量;②方法:用计数板计数;③缺点:不能区分死菌与活菌。
(2)间接计数法(活菌计数法)
①原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活
②操作
a、设置重复组,增强实验的说服力与准确性。
b、为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。
③计算公式:每克样品中的菌株数=(c÷V)×M,其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。
(1)牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白质的水解产物,即可以作为氮源,也可以作为碳源。平板为固体培养基,故需要加入琼脂,即培养基的成分X为琼脂。配置好培养基后,需将培养基和培养皿进行灭菌,再倒平板,即配制培养基的基本步骤是计算—称量—溶化—灭菌—倒平板
(2)若培养得到的菌落数目偏多,难以统计,应在第3步增加梯度稀释步骤。
(3)发现一个平板所得数据和另外两个偏差较大,在做原始记录时也应对该数据如实填写,C正确,故选C。为了保证实验可靠,需要重复实验(或设置多个平行实验)。
(4)通常用75%的酒精对手进行消毒,而不用95%的酒精,其原因是酒精能使蛋白质变性,但95%酒精浓度过高,会使细菌周围形成一层由凝固蛋白质组成的保护膜,使酒精分子不能进入细菌,达不到杀死细菌的作用。