图为EcoRⅠ限制酶的切割位置示意图.相关叙述正确的为①限制酶EcoRⅠ能识别GAATTC序列的位点 ②限制酶EcoRⅠ的切割位点为G和A之间 ③限制酶EcoRⅠ的作用本质是将两个核苷酸之间的磷酸二酯——青夏教育精英家教网—

图为EcoRⅠ限制酶的切割位置示意图，相关叙述正确的为
①限制酶EcoRⅠ能识别GAATTC序列的位点 ②限制酶EcoRⅠ的切割位点为G和A之间 ③限制酶EcoRⅠ的作用本质是将两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 ④SmaⅠ限制酶识别的序列与EcoRⅠ限制酶识别的序列均为6个核苷酸

[ ]

A．①
B．②
C．③
D．④

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我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图。图中质粒表示基因工程中经常选用的载体—pBR322质粒，Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因。根据下图回答下列问题（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：

（1）过程②必需的酶是，过程④必需的酶是。⑤过程中为提高成功率，常用溶液处理大肠杆菌。

（2）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒pBR322进行切割，用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时，则形成的DNA片段共种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段的比例是。

（3）如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌（不含Amp^r、Tet^r抗性质粒）先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。接种到甲培养基上的目的是筛选的大肠杆菌，含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态分别是，。

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我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图。图中质粒表示基因工程中经常选用的载体—pBR322质粒，Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因。根据上图回答下列问题（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：

（1）过程②必需的酶是________________ ，过程④必需的酶是________________。⑤过程中为提高成功率，常用________________溶液处理大肠杆菌。

（2）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒pBR322进行切割，用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时，则形成的DNA片段共________________ 种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段的比例是________________ 。

（3）如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌（不含Amp^r、Tet^r抗性质粒）先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。接种到甲培养基上的目的是筛选________________ 的大肠杆菌，含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态是________________ 。

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(8分)我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。pBR322质粒为基因工程中经常选用的载体，Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因，该质粒上有限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的识别和切割位点，如图（已知普通大肠杆菌中不含有pBR322质粒上任何基因；限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）。回答问题：

(1)过程②为　，质粒上的抗性基因作用是　。

(2)为防止④过程中出现多种重组质粒，一般用两种限制酶分别对目的基因和质粒进行剪切，从而把目的基因和质粒各自剪切出　 (不同／相同)的黏性末端。基因表达载体中目的基因除包含以上所描述的结构外，还必须含有。

(3)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ中的任意两种，同时对多个质粒pBR322进行切割，则形成的DNA片段共　种；为提高⑤过程成功率，常用　溶液处理大肠杆菌。

(4)现在用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置，一段时间后，菌落的生长状况如上图所示。甲培养基上能生长的大肠杆菌中含有　基因，与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌　。

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基因工程是指按人们意愿设计，通过改造基因或基因组而改变生物的遗传特性。基因工程操作过程中需要应运许多种生物技术。请回答下列问题：

（1）用PCR技术特异性地拷贝目的基因时加入引物1和引物2，引物为单链DNA片段，是子链合成延伸的基础。两种引物及其与模板链的结合位置如下图所示。第3轮循环的产物中，含有引物A的DNA分子有________个，独立X基因有________个。

（2）形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制酶MumⅠ和限制酶EcoRⅠ的识别序列及切割位点分别是。下图表示目的基因两端的碱基对序列。请在方框中绘出限制酶EcoRⅠ作用后获得目的基因。

（3）A、B、C、D表示四种质粒，其中箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表标记基因。适于作为目的基因运载体的质粒是________，理由是________。

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（七）分析有关基因表达的资料，回答问题。（9分）
取同种生物的不同类型细胞，检测其基因表达，结果如右图。

45. 基因1～8中有一个是控制核糖体蛋白质合成的基因，则该基因最有可能是基因                    。
46. 图所示细胞中功能最为近似的是细胞                  。
A.1与6             B.2与5
C.2与3             D.4与5
47. 判断图中细胞功能近似程度的依据是                        。
48. 现欲研究基因1和基因7连接后形成的新基因的功能，导入质粒前，用限制酶切割的正确位置是          。

49. 右上图是表达新基因用的质粒的示意图，若要将新基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的限制酶是            。
A. Hind Ⅲ                          B. EcoR I
C. Eco B                                D. Pst I
50. 新基因与质粒重组后的DNA分子导入受体细胞的概率很小，因此需进行       ，才能确定受体细胞已含有目的基因。
51. 在已确定有目的基因的受体细胞中，若质粒的抗青霉素基因缺失了两个碱基，将这样的受体细胞接种到含有青霉素的培养基中，该细胞中可能出现的结果是
A.抗青霉素基因不能转录              B.基因1和7没有表达
C.基因1和7不能连接                D.质粒上的酶切位置发生改变