(二)植物细胞质壁分离和复原

1．原理：成熟(有明显液泡)的植物细胞能够与外界溶液组成一个渗透系统，通过渗透作用的方式吸水或失水。

2．应用：(1)可以用于测定细胞液的浓度　 (2)可以用于判断细胞的死活

3.注意问题：

(1)细胞发生质壁分离后，细胞壁与细胞膜之间的空隙充满的是0.3mg/mL蔗糖溶液。

(2)动物细胞能发生渗透作用但不会发生质壁分离。

1.选材：选取紫色洋葱鳞片叶外表皮。其细胞液为紫色，在显微镜下与无色透明的细胞壁容易区分，观察到的质壁分离和复原效果明显。

　 　另外，取新鲜水绵、黑藻叶、南瓜表皮也可以做这个实验。

2.试剂：选用0.3g/ml 蔗糖糖溶液。浓度过高，细胞质壁分离速度虽然很快，但不久就会将细胞杀死，细胞不能进行质壁分离复原；若浓度过低，则不能引起细胞质壁分离或速度太慢。

另外，8% 食盐溶液、5%的硝酸钾溶液、一定浓度的尿素、甘油……也可使用，但后面三者在引起质壁分离后可自动复原。

3.时间的控制：做好质壁分离的实验后，不久就要做质壁分离复原实验。避免使质壁分离的细胞长时间处于较高浓度的外界溶液中，细胞过度失水而导致死亡。从而观察不到质壁分离复原的现象。

(一)质壁分离

原理：①细胞液浓度>细胞外溶液浓度时，细胞吸水；细胞液浓度<细胞外溶液浓度时，细胞失水

②细胞壁与原生质层的伸缩能力不同。

1、条件：细胞内外溶液浓度差，活细胞，大液泡

2、材料：紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞(具紫色大液泡)，质量浓度0.3g/mL的蔗糖溶液，清水等。

3、步骤：制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片→观察→盖玻片一側滴蔗糖溶液,另一側用吸水纸吸引→观察(液泡由大到小,颜色由浅变深,原生质层与细胞壁分离)→盖玻片一側滴清水, 另一側用吸水纸吸引→观察(质壁分离复原)

4、结论:　 细胞外溶液浓度 ＞ 细胞内溶液浓度，细胞失水　　　 质壁分离

细胞外溶液浓度 ＜ 细胞内溶液浓度，细胞吸水　　　 质壁分离复原

2、步骤：

(1)探究温度对酶活性的影响

温度对酶活性的影响

在温度对酶活性的影响的实验中，三支试管的条件，除温度外均相同。3号试管处在60℃的温度条件下，酶活性最大，试管中的淀粉被分解，滴入碘液后不会变蓝。2号试管的温度条件是100℃， 这样高温度条件下，淀粉酶已失去活性，1号试管的温度条件是O℃，低温抑制淀粉酶的活性。所以2号和1号试管中的淀粉都没有被分解，滴上碘液后都会变蓝，此实验可以证明；酶的催化作用需要适宜的温度条件，温度过高和过低都将影响酶的活性。

(2)探究pH对酶活性的影响

实验1 过氧化氢(H2O2)在过氧化氢酶的催化作用下，可以分解成水和氧气，可以放入带火星的木条，看能否复燃来检测是否有氧气产生。

2号试管内加入了盐酸，溶液的pH较低，3号试管内加入了氢氧化钠，溶液的pH较高，在过低或过高pH环境中，过氧化氢酶失去活性，不能使过氧化氢分解，没有氧气产生而1号试管没有加入酸或碱，溶液近似中性，过氧化氢酶将过氧化氢分解成水和氧气，使木条复燃。

实验2

原理：淀粉在淀粉酶的作用下，被分解成麦芽糖，麦芽糖能与斐林试剂发生氧化还原反应，生成砖红色沉淀

步骤	项目	试管1	试管2	试管3
1	加入可溶性淀粉溶液	2mL	2mL	2mL
2	加入蒸馏水	1mL	-	-
3	加入盐酸溶液	-	1mL	-
4	加入NaOH溶液	-	-	1mL
5	加入新配置的淀粉酶溶液	2滴	2滴	2滴
6	60℃水浴	5min	5min	5min
7	加入斐林试剂	2mL	2mL	2mL
8	50℃－60℃水浴	2min	2min	2min
9	观察结果	有砖红色沉淀	无	无

实验现象记录如下：1号试管有砖红色沉淀生成，2号试管无砖红色沉淀生成，3号试管无砖红色沉淀生成。

　　 2号试管内加入了盐酸，溶液的pH较低，3号试管内加入了氢氧化钠，溶液的pH较高，在这样的pH环境中，淀粉酶失去活性，不能使淀粉分解，所以试管中加人斐林试剂后并无砖红色沉淀生成。1号试管内没有加入酸或碱，溶液近似中性，这样的pH适于淀粉酶发挥催化作用，所以淀粉被分解并与斐林试剂反应，生成砖红色沉淀。以上实验可以证明，酶的催化作用需要适宜的pH，pH偏低或偏高都能影响酶的活性

原理：淀粉遇碘后，形成蓝色的复合物。淀粉酶可以可以使淀粉水解成麦芽糖，麦芽糖遇碘后，不形成蓝色的复合物。

1、材料：新配置的淀粉酶溶液，新鲜肝脏研磨液，可溶性淀粉溶液，过氧化氢溶液等。

2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色,球形或椭球形。

　　　　 用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色,细胞质接近无色。

步骤	操作方法	目的与作用
(1)取材	①新鲜的藓类的叶 ②菠菜叶下表皮略带一些叶肉	①藓类叶为单层细胞 ②下表皮容易撕取,要略带些叶肉
(2)制片	注意叶片不能太干了，保持有水的状态	以免影响细胞活性
(3)观察	叶绿体呈椭圆形，可随细胞质的流动而流动。叶绿体在弱光下以最大面积(长轴)转向光源，在强光下以最小面积(短轴)转向光源。
(1)取材	漱口，口腔内侧壁上轻刮几下
(2)染色	将口腔细胞放在健那绿液滴上
(3)观察	盖上盖玻片，显微镜下观察，线粒体被染成蓝绿色
问题	1、为什么不用植物细胞来观察线粒体？ 植物线粒体相对较少，叶绿体颜色易掩盖线粒体被染成的蓝绿色。 2、如果观察发现染色不足，如何补色？ 在盖玻片一侧滴加健那绿液，另一侧用吸水纸吸

1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片

1、显微镜的使用：取镜→安放→对光→压片→观察→收放。

(1)低倍镜使用：(观察任何标本都必须先用低倍镜，且标本应透明)

(2)高倍镜使用：

先使用低倍镜确定目标→移动装片，使目标位于视野中央→转动转换器，换用高倍镜→

调焦(转动细准焦螺旋)(视野较暗,可调反光镜或光圈)

3、蛋白质的检测

(1)试剂：双缩脲试剂(A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液)

(2)步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色)

2、脂肪的检测

(1)材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。

(2)步骤：制作切片(切片越薄越好)将最薄的花生切片放在载玻片中央

　　　　 　　　　↓

　染色(滴苏丹Ⅲ染液2-3滴切片上→2-3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精)

　　　　　　　　　 ↓

制作装片(滴1-2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片)

↓

镜检鉴定(显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒)

实验原理：可溶性糖中的还原糖(如葡萄糖、果糖、麦芽糖)，与斐林试剂发生作用，可以生成砖红色的沉淀。脂肪可以被苏丹III染成橘黄色。蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可以产生紫色反应。

1、还原糖的检测

还原性糖：有还原性基团--游离醛基或酮基的糖；如葡萄糖、果糖、麦芽糖、

(1)材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。

(2)试剂：斐林试剂(甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液)，现配现用。

(3)步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL(斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入)→水浴加热2min左右→观察颜色变化(浅蓝色→棕色→砖红色)