33.(7分)2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光,这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况,帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图,据图回答:

(1)图中通过过程①、②形成重组质粒,需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶工的识别序列和切点是一G↓GATCC一,限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是一↓GATC一。在质粒上有酶I的一个切点,在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

①请画出质粒被限制酶工切割后所形成的黏性末端,     。

②在DNA连接酶的作用下,上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来   ,理由是:     。

(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时,采用最多也最有效的方法是   。

(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上,GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因,其作用是     。获得的转基因克隆猪,可以解决的医学难题是,可以避免     。

(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白,黄色荧光蛋白等,采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是:     (用数字表示)。

 ①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列

 ②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计

 ③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)④表达出蓝色荧光蛋白。

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