14.（16分）下图表示从苏云金芽孢杆菌分离出来的杀虫晶体蛋白质基因（简称Bt基因）及形成转基因抗虫棉的的图解。请回答：

（1）图中a过程要用到的酶是　　　　　　 。

（2）在进行图中b过程时，由我国科学家独创的十分简便经济的方法是　　　　　　 ，此外，也经常采用　　　　　　 法。若要培育转基因绵羊，则此过程要用　　 　　　的方法。

（3）为确定抗虫棉是否培育成功，既要用　　 　　　　　　　　　　　　　　　　作探针进行分子杂交测试，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（4）活化的毒性物质应是一种　　　 分子，可以全部或部分嵌合于昆虫的细胞膜上，使细胞膜产生孔道，导致细胞由于渗透压平衡的破坏而破裂。

（5）我国在“863”计划资助下开展Bt抗虫棉、抗虫水稻等研究，可以减少农药、杀虫剂的使用。这将对　　 　　　　起重要作用。

13.（14分）荧火虫能发光是因为荧火虫体内可以通过荧光素酶催化的系列反应所产生的现象。如果荧光素酶存在于植物体内，也可使植物体发光。一直以来荧光素酶的惟一来源是从荧火虫腹部提取的，但加利福尼亚大学的一组科学家成功地通过转基因工程实现了将荧光素酶基因导入到大肠杆菌体内，并在大肠杆菌体内生产荧光素酶。请你根据已有的知识回答下列有关问题：

（1）目的基因主要指　　　 　　　　　　；在此转基因工程中，目的基因是　　　　　　　 。

（2）在基因工程过程中需要多种酶的参与，其中主要包括　　　　 　　　　　。

（3）将此目的基因导入到大肠杆菌体内需要载体的帮助。下列各项是选取载体的时候不必考虑的是（　 ）

A.能够在宿主细胞内复制并稳定存在　　　 B.具有特定的限制酶切点

C.具有与目的基因相同的碱基片断　　　　 D.具有某些标记基因

（4）在此转基因工程中，是由质粒承担载体的。在将体外重组的DNA导入大肠杆菌体内之前通常要用Ca²⁺处理大肠杆菌，目的是　　　　　　 　　　　　　　。

（5）正常根瘤菌体内的固氮基因与荧火虫体内的荧光素酶基因相比，除了碱基对的顺序、数目不同以外，在结构方面还存在不同点，主要不同是　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　。

（6）与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点是　　　　 　　　　　。

12.（16分）如图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：

（1）在基因工程中，A→B为__________技术，利用的原理是__________。

（2）加热至90 ℃～95 ℃的目的是使DNA中的__　 键断裂，这一过程在细胞内是通过__　 _　 _的作用来完成的。

（3）当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板链延伸，最终合成两条DNA分子，此过程所用酶应具备_____　 　_特点。

（4）目的基因导入绵羊受体细胞常用_____　 ____技术。

（5）B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是_____　 　______，要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，其中检测目的基因是否成功插入受体细胞染色体DNA中，常用的方法是___________________。

二．选择题

11.（11分）下面是一项“利用转基因番茄生产人胰岛素的方法”的专利摘要，请回答：

本发明利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素。所用的人胰岛素基因是依据植物“偏爱”的

密码子来设计所含的密码子，通过人工合成若干DNA片段，拼接而成，并且在胰岛素-COOH端加上KDEL内质网滞留序列，避免胰岛素在植物细胞中的降解。将该基因置于CaMV 35S启动子和果实专一性启动子2A12的驱动之下通过农杆菌介导的方法转入番茄中，在番茄的果实中表达人胰岛素。　

（1）本专利是采用___________方法获得目的基因的。获得的人胰岛素基因与人体细胞中胰岛素基因的碱基序列不同，但两者所编码的蛋白质中氨基酸序列相同，原因____　　　　　　　 ______。要想在体外获得大量该目的基因的片段，可以采用_____技术。该技术中使用的关键酶是___ ；原料是_______________。

（2）根据上述摘要，转基因操作时所用的载体是_____　 _______，载体上的_______可以转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。构建的基因表达载体中含有：____　 _______（从下列选项中选择）。

①目的基因　 　　②CaMV 35S启动子　 　③果实专一性启动子2A12　 　④引物　 ⑤标记基因　　 ⑥内含子滞留序列　 ⑦终止密码子　　 　　　⑧终止子

（3）如果要检测在受体细胞中是否存在目的基因可采用________　　 __技术。该技术中使用的基因探针也可以用来检测________________________ 。还可以从____　 ____水平进行鉴定。

10.下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正确的是（　　 ）

A.①是洗涤红细胞，去除血细胞表面的杂质

B.②是溶解DNA，去除不溶于酒精的杂质

C.③是溶解DNA，去除溶于2 mol/L NaCl溶液的杂质

D.④是稀释NaCl溶液，使DNA的溶解度降低，从NaCl溶液中析出

9.科学家将β－干扰素基因进行定点突变导入大肠杆菌表达，使干扰素第17位的半胱氨酸变成丝氨酸，结果大大提高了β－干扰素的抗病活性，并且提高了储存稳定性。该生物技术为（　　 ）

A.基因工程　　　 B.蛋白质工程　　　 C.基因突变　　　　 D.细胞工程

8.蛋白质工程的流程是（　　 ）

A.基因→表达→形成氨基酸序列的多肽链→形成具有高级结构的蛋白质→行使生物功能

B.对蛋白质进行分子设计→改造蛋白质分子→行使功能

C.蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相应的脱氧核苷酸序列

D.蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→合成相应mRNA

7.下列关于基因工程的应用，说法正确的是（　　 ）

A.我国转基因抗虫棉是转入了植物凝集素基因培育出来的

B.可用于转基因植物的抗虫基因只有植物凝集素基因和蛋白酶抑制剂基因

C.抗真菌转基因植物中，可使用的基因有几丁质酶基因和抗毒素合成基因

D.提高作物的抗盐碱和抗干旱的能力，与调节渗透压的基因无关

6.“工程菌”是指（　　 ）

A.用物理或化学方法诱发菌类自身某些基因得到高效表达的菌类细胞株系

B.用遗传工程的方法，把相同种类不同株系的菌类通过杂交得到新细胞株系

C.用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系

D.从自然界中选取能迅速增殖的菌类

5.下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（　　 ）

A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和基因进入受体细胞的载体

B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列

C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞主要是因为细菌繁殖快、遗传物质少

D.只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达