摘要：1．基因工程的操作工具 (1)分子手术刀--限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶简称限制酶.主要存在于原核生物中.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列.并且能在特定的切点上切割DNA分子.目前已经发现了200多种限制酶.例如.从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别GAATTC序列.并在G和A之间将这段序列切开.苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因.就能被某种限制酶切割下来.DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式--黏性末端和平末端.当限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA的两条链分别切开时.产生的是黏性末端.而当限制酶在它识别序列的中轴线处切开时.产生的则是平末端. 注意:①用限制酶切割DNA分子时.被破坏的是DNA链中的磷酸二酯键(即连接相邻两个脱氧核苷酸的键). ②黏性末端是指双链DNA分子被限制酶切开后.切口处的两个末端伸出的由若干特定核苷酸组成的单链. (2)分子缝合针--DNA连接酶 从上图中可以看出.把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割.然后让二者的黏性末端按碱基互补配对原则形成双链.用DNA连接酶催化两条DNA链的相邻两个碱基之间形成磷酸二酯键.从而将相邻的脱氧核苷酸连接起来.DNA连接酶有两类:一类是从大肠杆菌中分离得到的.称为E·coli DNA连接酶,另一类是从T4噬菌体中分离出来的．称为T4 DNA连接酶.E·coli DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来.不能将双链DNA片段平末端之间进行连接.而T4-DNA连接酶既可以连接双链DNA片段互补的黏性末端.又可以连接双链DNA片段的平末端.但连接平末端的效率较低 (3)分子运输车一--基因进入受体细胞的载体 ① 使用运载体的目的 在基因工程中使用运载体有两个目的:一是用它作为运载工具.将目的基因转移到宿主细胞中去,二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制. ② 运载体的种类 现在所利用的运载体主要有两类:一类是细菌的质粒.它是一种相对分子质量较小.独立于细菌核区DNA之外的双链环状DNA.另一类运载体是噬菌体或某些灭活的病毒等.现在人们还在寻找新的运载体.如叶绿体或线粒体等也有可能成为运载体. ③ 基因的运载体必须具备的条件 a．载体DNA必须有一个或多个限制酶的切割位点.以便目的基因可以插入到载体上去.这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置.还必须是在质粒本身需要的基因片段之外.这样才不至于因目的基因的插入而导致其自身失活. b．载体DNA必须具备自我复制的能力.或可以整合到受体染色体DNA上随受体染色体DNA的复制而同步复制. c．载体DNA必须带有标记基因.以便重组后进行重组子的筛选. d．载体DNA必须是安全的.不会对受体细胞有害.不能进入到除受体细胞以外的其他生物细胞中去. e．载体DNA分子大小应适中.以便提取和在体外进行操作.太大则不便操作. 一般来说.天然运载体往往不能满足上述要求.因此根据不同的目的和需要.对运载体进行人工改造现在使用的质粒载体几乎都是经过改造的.

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