摘要:(二)基因工程的基本操作程序 第一步:目的基因的获取 1.目的基因是指: 编码蛋白质的结构基因 . 2.原核基因采取直接分离获得.真核基因是人工合成.人工合成目的基因的常用方法有反转录法 和化学合成法 . 3.PCR技术扩增目的基因 (1)原理:DNA双链复制 (2)过程:第一步:加热至90-95℃DNA解链,第二步:冷却到55-60℃.引物结合到互补DNA链,第三步:加热至70-75℃.热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成. 第二步:基因表达载体的构建 1.目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在.并且可以遗传至下一代.使目的基因能够表达和发挥作用. 2.组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因 (1)启动子:是一段有特殊结构的DNA片段.位于基因的首端.是RNA聚合酶识别和结合的部位.能驱动基因转录出mRNA.最终获得所需的蛋白质. (2)终止子:也是一段有特殊结构的DNA片段 .位于基因的尾端. (3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因.从而将含有目的基因的细胞筛选出来.常用的标记基因是抗生素基因. 第三步:将目的基因导入受体细胞 1.转化的概念:是目的基因进入受体细胞内.并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程. 2.常用的转化方法: 将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是 农杆菌转化法.其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等. 将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是 显微注射技术.此方法的受体细胞多是 受精卵. 将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快.多为单细胞.遗传物质相对较少 .最常用的原核细胞是 大肠杆菌 .其转化方法是:先用 Ca2+ 处理细胞.使其成为 感受态细胞 .再将 重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合.在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子.完成转化过程. 3.重组细胞导入受体细胞后.筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达. 第四步:目的基因的检测和表达 1.首先要检测 转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因.方法是采用 DNA分子杂交技术. 2.其次还要检测 目的基因是否转录出了mRNA.方法是采用 用标记的目的基因作探针与mRNA杂交. 3.最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质.方法是从转基因生物中提取 蛋白质.用相应的 抗体进行抗原-抗体杂交. 4.有时还需进行 个体生物学水平的鉴定.如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状.

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请分析回答下列有关现代生物科技方面的问题:

 (1)基因工程的基本操作程序主要包括五个步骤:第一步是目的基因的获取,第二步是           ,第三步是将目的基因导入受体细胞,第四步是                    ,第五步是实现功能表达。

①获取目的基因的方法很多,常用的有                  、                     (至少写出两种)。

②通常在第一步和第二步的操作中需要的工具酶是                              

③如果转基因植物的花粉中含有毒蛋白,将引起的安全性问题包括(多项选择)      

 A生物安全        B环境安全        C食品安全       D伦理道德问题

(2)请回答下列有关单克隆抗体制备的问题:

①与动物细胞融合过程相比,植物体细胞杂交在细胞融合之前要用          处理去除细胞壁,动物细胞融合与植物原生质体融合方法的不同之处是                           

②小鼠体内注入抗原后可获已免疫的B细胞,这种细胞的特点是                       。从患骨髓瘤的小鼠体内可获取骨髓瘤细胞,这种细胞的特点是                       

③经人工诱导后,骨髓瘤细胞和已免疫的B淋巴细胞融合,还可能产生                的融合细胞(只考虑两两融合),因此还需对融合细胞进行筛选和检测。

④培养筛选出的杂交瘤细胞,可获得大量单克隆抗体,这种抗体与常规的血清抗体相比,最大的优越性是                                                                 

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请分析回答下列有关现代生物科技方面的问题:
(1)基因工程的基本操作程序主要包括五个步骤:第一步是目的基因的获取,第二步是          ,第三步是将目的基因导入受体细胞,第四步是                   ,第五步是实现功能表达。
①获取目的基因的方法很多,常用的有                 、                    (至少写出两种)。
②通常在第一步和第二步的操作中需要的工具酶是                             
③如果转基因植物的花粉中含有毒蛋白,将引起的安全性问题包括(多项选择)      
A生物安全        B环境安全        C食品安全       D伦理道德问题
(2)请回答下列有关单克隆抗体制备的问题:
①与动物细胞融合过程相比,植物体细胞杂交在细胞融合之前要用         处理去除细胞壁,动物细胞融合与植物原生质体融合方法的不同之处是                           
②小鼠体内注入抗原后可获已免疫的B细胞,这种细胞的特点是                      。从患骨髓瘤的小鼠体内可获取骨髓瘤细胞,这种细胞的特点是                       
③经人工诱导后,骨髓瘤细胞和已免疫的B淋巴细胞融合,还可能产生              的融合细胞(只考虑两两融合),因此还需对融合细胞进行筛选和检测。
④培养筛选出的杂交瘤细胞,可获得大量单克隆抗体,这种抗体与常规的血清抗体相比,最大的优越性是                                                                 

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 (1)基因工程的基本操作程序主要包括五个步骤:第一步是目的基因的获取,第二步是           ,第三步是将目的基因导入受体细胞,第四步是                    ,第五步是实现功能表达。

①获取目的基因的方法很多,常用的有                  、                     (至少写出两种)。

②通常在第一步和第二步的操作中需要的工具酶是                              

③如果转基因植物的花粉中含有毒蛋白,将引起的安全性问题包括(多项选择)      

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(2)请回答下列有关单克隆抗体制备的问题:

①与动物细胞融合过程相比,植物体细胞杂交在细胞融合之前要用          处理去除细胞壁,动物细胞融合与植物原生质体融合方法的不同之处是                           

②小鼠体内注入抗原后可获已免疫的B细胞,这种细胞的特点是                       。从患骨髓瘤的小鼠体内可获取骨髓瘤细胞,这种细胞的特点是                       

③经人工诱导后,骨髓瘤细胞和已免疫的B淋巴细胞融合,还可能产生                的融合细胞(只考虑两两融合),因此还需对融合细胞进行筛选和检测。

④培养筛选出的杂交瘤细胞,可获得大量单克隆抗体,这种抗体与常规的血清抗体相比,最大的优越性是                                                                 

 

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