摘要:(一)基因工程的基本工具 1.“分子手术刀 --限制性核酸内切酶 (1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的. (2)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列.并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开.因此具有专一性. (3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端. 2.“分子缝合针 --DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶)的比较: ①相同点:都缝合磷酸二酯键. ②区别:E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体.只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来,而T4DNA连接酶能缝合两种末端.但连接平末端的之间的效率较低. (2)与DNA聚合酶作用的异同:­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端.形成磷酸二酯键.DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端.形成磷酸二酯键. 3.“分子运输车 --载体 (1)载体具备的条件: ①能在受体细胞中复制并稳定保存. ②具有一至多个限制酶切点.供外源DNA片段插入. ③具有标记基因.供重组DNA的鉴定和选择. (2)最常用的载体是­­质粒,它是一种裸露的.结构简单的.独立于细菌染色体之外.并具有自我复制能力的双链环状DNA分子. (3)其它载体: 噬菌体的衍生物.动植物病毒

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(11分)“白菜—甘蓝”是科学家用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种,它具有生长期短、耐热性强和易储存等优点。如图是“白菜—甘蓝”培育过程示意图,请完成下列问题:

(1)培育成白菜—甘蓝植株,采用的技术手段是________。该过程应用的原理是______和__________。

(2)要制备“白菜—甘蓝”的人工种子,要在d步骤选取具有生根、发芽能力的________结构,包裹上人工种皮即可。

(3)在d过程培养中,培养基的成分通常包括水、______、有机营养和________等,同时,在培养过程中,除必要的温度、光照和氧气等外界条件外,成功的另一个关键是操作过程中必须保证__________________。

(4)在a过程中诱导原生质体融合最常用的诱导剂是______________.

(5)要获得图中白菜和甘蓝的原生质体,首先需要分别除去白菜和甘蓝细胞的细胞壁。用以下材料和用具:紫色洋葱鳞片叶、适宜浓度的蔗糖溶液、纤维素酶和果胶酶、蒸馏水、镊子、显微镜、载玻片等,可除去细胞壁。在实验过程中要选取适宜浓度的蔗糖溶液而不用蒸馏水的理由是

_______________________________________________________(2)

(6)采用特异性引物对另两种植物花椰菜和黑芥基因组DNA 进行PCR 扩增,得到两亲本的差异性条带,可用于杂种及纯种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4 进行PCR 扩增的结果。据图判断,再生植株1—4 中后代性状不分离的是         

 

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