40.  ［生物——选修3:现代生物科技专题］(15分）

某质粒上有SalI、Hi_ndm、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨 苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如下图所示，请回答下列问题。

(1)将抗盐基因导入烟草细胞内,使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状(变异性状)的来 源属于______。

(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞,一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐 基因在烟草细胞中不能______，也不能______。

(3)在构建重组质粒时,应选用______和______两种隳对______和______进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

(4)  基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图 表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检 测基因表达载体是否导入了农杆菌。

培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有______、______。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______作探针进行分子杂交检测，又要用______方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。

(5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要 用_______技术，愈伤组织经______进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加                         。

萝卜的生长发育过程受多种激素的共同调节，其中细胞分裂素起着重要作用。
（1）细胞分裂素主要存在于正在进行细胞分裂的部位，其主要生理功能是促进___________。
（2）研究还发现，氨基酸等营养物质可以向细胞分裂素浓度高的部位移动。为验证这一结论，有人设计了下列实验方案，请根据提供的实验材料和用具，将实验步骤补充完整，并预测实验结果。
材料用具：生长状况相同的萝卜成熟叶片若干，适宜浓度的细胞分裂素溶液，含¹⁴C标记的氨基酸溶液(氨基酸可被叶片吸收并在叶片内移动)，蒸馏水，棉签，检测放射性强度的设备等。
实验步骤：
第一步：取生长状况相同的萝卜成熟叶片若干，在叶片左半叶某一部位涂抹含¹⁴C标记的氨基酸溶液(如图所示)。

第二步：将叶片均分成2组，编号a、b。
第三步：在a组叶片右半叶某一部位涂抹_______________________；在b组叶片相同位置涂抹______________,做对照组。
第四步：在相同条件下放置一段时间后，检测两组叶片涂抹部位的放射性强度。
实验结果：                                                          。

萝卜的生长发育过程受多种激素的共同调节，其中细胞分裂素起着重要作用。

（1）细胞分裂素主要存在于正在进行细胞分裂的部位，其主要生理功能是促进___________。

（2）研究还发现，氨基酸等营养物质可以向细胞分裂素浓度高的部位移动。为验证这一结论，有人设计了下列实验方案，请根据提供的实验材料和用具，将实验步骤补充完整，并预测实验结果。

材料用具：生长状况相同的萝卜成熟叶片若干，适宜浓度的细胞分裂素溶液，含¹⁴C标记的氨基酸溶液(氨基酸可被叶片吸收并在叶片内移动)，蒸馏水，棉签，检测放射性强度的设备等。

实验步骤：

第一步：取生长状况相同的萝卜成熟叶片若干，在叶片左半叶某一部位涂抹含¹⁴C标记的氨基酸溶液(如图所示)。

第二步：将叶片均分成2组，编号a、b。

第三步：在a组叶片右半叶某一部位涂抹_______________________；在b组叶片相同位置涂抹______________,做对照组。

第四步：在相同条件下放置一段时间后，检测两组叶片涂抹部位的放射性强度。

实验结果：                                                          。

（现代生物科技）（8分）用小鼠进行DNA重组研究中形成的“基因敲除”技术，能“敲除”DNA分子上的特定基因。该技术的主要过程如下：
第一步：分离小鼠胚胎干细胞，这些细胞中含有需要改造的基因，称“靶基因”。
第二步：获取与“靶基因”同源的DNA片断，利用特定技术在该DNA片段上插入neo^R基因
（新霉素抗性基因）成为突变DNA（如下图），使该片段上的靶基因失活。
第三步：将插入neo^R基因（新霉素抗性基因）的靶基因转移入胚胎干细胞，再通过同源互换，用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个，完成对胚胎干细胞的基因改造。
第四步：将第三步处理后的胚胎于细胞，转移到特定培养基中筛选培养。
其基本原理如下图所示：

（1）第二步中neo^R基因插入靶基因使用的工具酶是                     。neo^R基因不仅能使靶基因失活，还是         ；“靶基因失活”的含义是           
（2）从研究者成功获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞，到将该细胞培育成“基因敲除”小鼠，运用到的生物技术有         、        、         等。
（3）科学家可以通过‘“基因敲除”技术来治疗疾病，上题中获得的基因敲除小鼠，能否直接用来研究基因功能并说明原因                      ，                   
                       。     

（现代生物科技）（8分）用小鼠进行DNA重组研究中形成的“基因敲除”技术，能“敲除”DNA分子上的特定基因。该技术的主要过程如下：
第一步：分离小鼠胚胎干细胞，这些细胞中含有需要改造的基因，称“靶基因”。
第二步：获取与“靶基因”同源的DNA片断，利用特定技术在该DNA片段上插入neo^R基因
（新霉素抗性基因）成为突变DNA（如下图），使该片段上的靶基因失活。
第三步：将插入neo^R基因（新霉素抗性基因）的靶基因转移入胚胎干细胞，再通过同源互换，用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个，完成对胚胎干细胞的基因改造。
第四步：将第三步处理后的胚胎于细胞，转移到特定培养基中筛选培养。
其基本原理如下图所示：

（1）第二步中neo^R基因插入靶基因使用的工具酶是                     。neo^R基因不仅能使靶基因失活，还是         ；“靶基因失活”的含义是           
（2）从研究者成功获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞，到将该细胞培育成“基因敲除”小鼠，运用到的生物技术有         、        、         等。
（3）科学家可以通过‘“基因敲除”技术来治疗疾病，上题中获得的基因敲除小鼠，能否直接用来研究基因功能并说明原因                      ，                   
                       。