（生物技术实践，10分）莠去津是一种含氮农药，在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，按下面程序选育能 降解莠去津的细菌（目的菌）。已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明。据图回答：

(1)由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的过程称为 ____ ，目的是________________________。

(2)在将C瓶菌种接种到固体培养基之前通常要进行 ____ ，将菌种接种到固体培养基的方法有平板划线法和________法，从图中看本实验采用的是 ________ （填“前者”或“后者”）。一段时间后，培养基出现无透明带菌落和有透明带菌落两种菌落，我们筛选的目的菌是      菌落中的细菌，该菌落生长所需的氮元素主要来源于______________________。

(3)为弄清固体培养基中的非目的菌落来自C瓶菌种还是培养基，要如何设置对照组？________________。

(4)此实验中，某同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。该同学的实验结果产生的原因可能是________________________________。

（生物技术实践，10分）下面是将四倍体兰花的叶片通过植物组织培养形成植株的示意图，结合图解回答相关 问题：

(1)选取四倍体兰花叶片时，要选择 __________ 的叶片；外植体消毒后才可以 __________ ，且此操作必须在酒精灯旁进行。

(2)植物激素中 __________和___________是启动细胞分裂的关键性激素；与①阶段相比，②阶段 __________ （填激素名称）的作用呈现加强的趋势。

(3)现代药理研究表明，兰花的芳香成分--芳香油使人心旷神怡，清除宿气，解郁消闷，提神醒脑。实验室提取植物芳香油的方法有蒸馏、____和__________ 等，根据蒸馏过程中原料放置的位置，可以将水蒸气蒸馏法划分为 __________、__________ 的__________。

（生物技术实践，10分）十九世纪中期，法国科学家巴斯德证明食品发酵是由于微生物的作用。如今，形形色色的发酵食品在食品业中占有重要的地位。

（1）人们喜爱的美味食品――腐乳就是我国独特的传统发酵食品。

①腐乳是用豆腐发酵制成，多种微生物参与发酵，其中起主要作用的是___________。

②在腐乳的制作过程中，从微生物培养的角度来看，豆腐应该是_____________。

③腐乳制作的原理是____________________________________________________。

（2）酸菜味道鲜美，同时也是一种很好的长期贮藏蔬菜的方法。

①酸菜是利用白菜中的糖分在乳酸菌的作用下腌制而成。白菜为什么会变成酸菜呢?用反应式表示：_______________________________________________。

②在充足的碳源、氮源、无机盐和水的条件下，乳酸菌仍然不能正常生长，还需要在培养基中添加_____________________________________。   

（3）应用微生物发酵要分离纯化菌种。

①应用平板划线法分离时，从第二次划线操作起，每次总是要从上一次划线的末端开始划线，并划线数次。其原因是________________________________________。

②获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，实验室中一般要对所用的接种用具和培养基等进行_______________________，对工作场所和操作者的手等进行__________________。

（09韶关市调研）(生物技术实践，10分)

生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶解→酵母发酵→蒸馏→成品。

（1）纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化生产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。

①最好选择怎样的环境采集土样？_________________________________。

②以下是一种培养基配方：纤维素粉5 g、NaN0₃ 1g、Na₂HP0₄?7H₂0 1．2g、KH₂P0₄0．9 g、MgS0₄．7H₂O 0．5g、KCl 0．5g、酵母膏0．5 g、水解酪素O．5g(蒸馏水定容到1000mL)。该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是 ____________________________。

③为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入______________染液，将筛选获得的菌液稀释后用______________方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生______________的菌落作为菌种进行扩大培养。

④纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量如何呢?请设计实验进行检测。____________________________________。

（2）进行工业化酶解时，为了使纤维素酶能反复使用，可以采用______________技术。

（3）乙醇是酵母菌的发酵产物。发酵时酵母菌直接利用的物质是______________。

（4）发酵时乙醇浓度升高会对酵母菌产生毒性，从而影响进一步的发酵。科学家利用基因工程方法创造出一种对乙醇浓度有高耐受力的酵母菌新菌种，该过程需采用PCR技术扩增目的基因。与体内DNA复制相比，PCR反应体系需加入哪两种特别的物质？_______________________________________________________。

（09深圳市调研）（生物技术实践，10分）多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。请回答下列有关PCR技术的基本原理及应用问题。

（1）DNA的两条链是反向平行的，通常将____________的末端称为5’端，当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的_________开始延伸DNA链。

（2）PCR利用了DNA的热变性原理解决了打开DNA双链的问题，但又导致了DNA聚合酶失活的新问题。到20世纪80年代，科学家从一种Taq细菌中分离到__________________，它的发现和应用解决了上述问题；要将Taq细菌从其它普通的微生物中分离出来，所用的培养基叫___________________________。

（3）PCR的每次循环可以分为__________________三步。假设在PCR反应中，只有一个DNA片段作为模板，请计算在5次循环后，反应物中大约有_________个这样的DNA片段。

（4）请用简图表示出一个DNA片段PCR反应中第二轮的产物。

（5）简述PCR技术的主要应用。