摘要:[生物-现代生物科技专题]必答题 Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图: (1)步骤①中.在核移植前应去除卵母细胞的 . (2)步骤②中.重组胚胎培养到 期时.可从其内细胞团分离出ES细胞. (3)步骤③中.需要构建含有基因Rag2的表达载体.可以根据Rag2基因的 设计引物.利用PCR技术扩增Rag2基因片段.用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段.为将该片段直接连接到表达载体.所选择的表达载体上应具有 酶的酶切位点. (4)为检测Rag2基因的表达情况.可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 .用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验. [答案] (1)细胞核 (2)囊胚 (3)核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ (4)蛋白质 [解析](1)步骤①是核移植过程.体细胞核移植前要除去受体卵母细胞的细胞核.原因是若不去掉卵母细胞的细胞核.就会造成细胞里面就有两个细胞核.使得遗传物质是不稳定的. (2)ES细胞是由早期胚胎的内细胞团分离出来的一类细胞. (3)步骤③过程是导入目的基因--Rag2基因于ES细胞中的基因表达载体的构建过程.在生物体外可通过PCR技术扩增目的基因.其条件是模板DNA.Rag2基因的核苷酸序列设计引物.四种脱氧核苷酸.热稳定DNA聚合酶等.另外根据题干可知.获得Rag2目的基因需要用 HindⅢ和PstⅠ两种限制酶.所以在构建表达载体时.所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点. (4)检测目的基因是否翻译相应蛋白质时.应采用抗原-抗体杂交法.即提取蛋白质.用相应的抗体进行抗体-抗原杂交.看是否有杂交带 专题4生物技术的安全和伦理问题

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