摘要:4.(2012年高考福建卷)肺细胞中的let-7基因表达减弱.癌基因RAS表达增强.会引发肺癌.研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达.发现肺癌细胞的增殖受到抑制.该基因工程技术基本流程如图1. 图1 图2 请回答: (1)进行过程①时.需用 酶切开载体以插入let-7基因.载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位.以驱动let-7基因转录.该部位称为 . (2)进行过程②时.需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞.以利于传代培养. (3)研究发现.let-7基因能影响癌基因RAS的表达.其影响机理如图2.据图分析.可从细胞中提取 进行分子杂交.以直接检测let-7基因是否转录.肺癌细胞增殖受到抑制.可能是由于细胞中 含量减少引起的. 解析:此题考查基因工程应用的相关知识.(1)构建基因表达载体时.需要用同种限制酶切割目的基因和载体.使之产生相同的黏性末端.载体应有启动子.终止子和标记基因.其中启动子是RNA聚合酶识别和结合部位.驱动基因转录.(2)动物细胞培养时.常用胰蛋白酶处理贴壁的细胞.使之相互分离.以利于传代培养.(3)检验目的基因是否表达.常用分子杂交法.从被导入目的基因的细胞内提取RNA.与目的基因单链杂交.如果出现杂交带.说明目的基因已转录.由图2知.当let-7基因转录出来的miRNA与癌基因RAS转录出的mRNA杂交时.就会抑制RAS蛋白的产生.故肺癌细胞增殖受到抑制.可能是由于细胞中RAS蛋白含量减少引起的. 答案:(1)限制性核酸内切 启动子 RNA RAS蛋白 课时高效训练

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