摘要:Ⅱ.Ti质粒 T-DNA (3)农杆菌 乙植物的愈伤组织 目的基因

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将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗,饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。

  表1引物对序列表

引物对A

P1 AACTGAAATGTAGCTATC 

P2 TTAAGTCCATTACTCTAG

引物对B

S1 GTCCGACTAGTGGCTGTG 

S2 AGCTGGCGTTTAGCCTCG

  表2 几种限制性内切酶识别序列及切割位点表

限制性内切酶

Alu Ⅰ

EcoR Ⅰ

Pst Ⅰ

Sma Ⅰ

切割位点

AG↓CT

TC↑GA

G↓AATTC

CTTAA↑G

CTGCA↓G

G↑ACGTC

CCC↓GGG

GGG↑CCC

  请根据以上图表回答下列问题。

  (1)在采用常规PCR技术扩增目的基因的过程中,使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶,其最主要的特点是________________________________________________________________________。

  (2)PCR过程中退火(复性)温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列,图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度?________________________________________________________________________。

  (3)图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求?

  __________________。

  (4)为将外源基因转入马铃薯,图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为________。

  (5)对符合设计要求的重组质粒T进行酶切,假设所用的酶均可将识别位点完全切开,请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列,对以下酶切结果作出判断。

  ①采用EcoRI和Pst I酶切,得到________种DNA片段。

  ②采用EcoRI和SmaI酶切,得到________种DNA片段。

 

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