摘要:5.下图为某种质粒表达载体简图.小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI.BamHI的酶切位点.ampR为青霉素抗性基因.tetR为四环素抗性基因.P为启动子.T为终止子.ori为复制原点.已知目的基因的两端分别包括有EcoRI.BamHI在内的多种酶的酶切位点. 据图回答: (1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切.酶切产物用DNA连接酶进行连接后.其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有 . . 三种.若要从这些连接产物中分离出重组质粒.需要对这些连接产物进行 . (2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验.之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中.能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 ,若接种到含青霉素的培养基中.能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 . (3)目的基因表达时.RNA聚合酶识别和结合的位点是 .其合成的产物是 . (4)在上述实验中.为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接.酶切时应选用的酶是 . 解析:在基因表达载体的构建过程中用同种限制酶来切割目的基因和质粒.使之产生相同的黏性末端.以利于DNA片段的连接.将切割后的目的基因和质粒.用DNA连接酶进行连接.它们之间随机连接.可有三种产物:目的基因-载体连接物.载体-载体连接物和目的基因-目的基因连接物.从图中可以看出.目的基因的插入位点在抗四环素基因上.可推知:目的基因-载体连接物的抗四环素基因被破坏.丧失了抗四环素的能力.但保留了抗青霉素的能力,载体-载体连接物既保留了抗四环素的能力也保留了抗青霉素的能力,目的基因-目的基因连接物既无抗青霉素基因也无抗四环素基因.不具备抗性.获得DNA连接产物以后.必须通过筛选方能获得所需的基因表达载体.导入宿主细胞后方能表达获得基因产物.目的基因表达过程中.RNA聚合酶首先与启动子结合.指导目的基因转录产生mRNA.mRNA再指导蛋白质的合成.从图中可看出抗四环素基因上有两个不同的切割位点.所以在实际操作过程中.为避免使切割后的末端任意连接.可用EcoRI和BamHI同时对目的基因和质粒进行切割.使同一切割产物的黏性末端不同. 答案:(1)目的基因-载体连接物 载体-载体连接物 目的基因-目的基因连接物 分离纯化 (2)载体-载体连接物 目的基因-载体连接物.载体-载体连接物 EcoRI和BamHI

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