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40. ［生物——选修3:现代生物科技专题］(15分）
某质粒上有SalI、Hindm、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨 苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如下图所示，请回答下列问题。
(1)将抗盐基因导入烟草细胞内,使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状(变异性状)的来 源属于______。
(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞,一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐 基因在烟草细胞中不能______，也不能______。
(3)在构建重组质粒时,应选用______和______两种隳对______和______进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。
(4) 基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图 表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检 测基因表达载体是否导入了农杆菌。
培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有______、______。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______作探针进行分子杂交检测，又要用______方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。
(5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要 用_______技术，愈伤组织经______进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加 。
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2012年诺贝尔生理学或医学奖授予两位在细胞核重编程领域有重大贡献的科学家。科学家把c—Myc等4个关键基因通过逆转录病毒载体转入小鼠的成纤维细胞，使其变成诱导多能干细胞——iPS细胞，这意味着未成熟的细胞能够发展成所有类型的细胞。
（1）基因工程中经常使用的工具酶是_____________，常用的载体除了动植物病毒外还有_____________和_____________。
（2）若想增强载体病毒颗粒的感染性，可利用_____________技术改造病毒外壳蛋白，直接对_____________进行操作。
（3）应用_____________技术得到重组细胞，激活重组细胞发育成早期胚胎，使用从_____________中获得的胚胎干细胞，在培养中根据需要加入相应的小分子物质以促进其_____________得到各种组织器官，用于治疗某些疾病，这种技术称为_____________。
（4）iPS细胞的获得不使用胚胎细胞或卵细胞，也不诱导发育成个体，因此不会像生殖性克隆一样引发_____________问题。
（5）iPS细胞在体外已成功地被诱导分化为神经元细胞、神经胶质细胞、心血管细胞和原始生殖细胞等，究其本质原因是基因_________________________的结果。
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绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒（TMV）基因，可以合成一种抗TMV 蛋白，叶片对 TMV具有抗感染性。烟草是重要的经济作物，由于 TMV 的感染会导致大幅度减产。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草，主要流程如下图所示。
（1）科学家首先从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA，然后合成目的基因。图中过程①表示____________，获得的DNA必须在两侧添加____________和____________。
（2）过程③构建的重组Ti 质粒时，必须使用____________和____________两种工具酶。
（3）由图分析，在过程③构建的重组Ti 质粒上应该含有卡那霉素抗性基因作为____________，重组Ti 质粒导入烟草体细胞的方法是____________。
（4）在过程⑤培养基中除含有卡那霉素及植物必需的各种营养成分外，还必须添加____________，以保证受体细胞能培养成再生植株。
（5）过程⑥可采取____________的方法，检测植株是否合成了抗 TMV 蛋白。在个体水平的鉴定过程中，可通过____________的方法来确定植株是否具有抗性。
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科学家利用动物的卵细胞和皮肤成纤维细胞，成功克隆出了5个动物胚胎，进而开发出有研究价值的干细胞。请回答下列问题：
（1）上述过程中主要应用到的动物细胞工程技术有________。（至少答2项）
（2）在使用合成培养基进行胚胎干细胞培养时，通常需要加入________，等天然成分。在细胞培养时，要保证被培养的细胞处于一定的气体环境，所需要的气体主要有O2和CO2，CO2的作用主要是________。
（3）科学家欲进行胚胎分割移植，则应该选择发育良好、形态正常的________，将其移入盛有操作渡的培养皿中，然后用分割针进行分割。
（4）胚胎移植是否成功，与受体的生理状况有关，常用激素对受体进行________处理。大量研究已经证明，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生________反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。
（5）下图为人类“治疗性克隆”的大概过程，在体外培养条件下，为保持胚胎干细胞的未分化状态，通常在培养皿中铺上一层________细胞或培养在添加了抑制因子的培养液中。“治疗性克隆”的结果说明________。
［生物――选修３ 现代生物科技专题］
长期以来，优良种畜的繁殖速度始终是限制畜牧养殖业发展的瓶颈，近年来发展起来的细胞工程和胚胎工程技术为优良种畜的快速繁殖带来了无限生机，请据图完成下列问题：
（1）在试管牛和克隆羊的培育过程中都必须用到的生物技术有 、
（至少写出二项）。
（2）和受精有关的过程有：①第一次卵裂开始；②释放第二极体；③顶体反应；④穿越透明带；⑤雌、雄原核的形成；⑥核膜消失，雌、雄原核融合。
其正确的顺序为 （填序号）。
（3）超数排卵技术的处理措施是对供体母牛注射 ；冲卵实质上是用特定装置，将供体母牛子宫内的 冲洗出来。
（4）从A到E中，适宜于牛的胚胎移植时期有 ；图中标号3为 ，它将来可发育为胎膜和胚盘。
（5）动物的早期胚胎移植到同种且 与供体相同的动物体内，使之继续发育为新个体的技术叫做胚胎移植。用某染料鉴定胚胎细胞是否为活细胞时，发现活胚胎细胞不能被染色，其原因是活细胞膜 。
（6）试管牛E的性别为 ，克隆羊多利的性状和 最接近，原因是 。
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