(10分）研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂一内皮抑素，它能有效地抑制血管增生。下面是获得重组内皮抑素的方法，请分析回答下列问题：

(1) 从肝细胞中分离总RNA，经_________获得cDNA，之后经过_________扩增内皮抑素基因。

(2) 扩增的目的基因与PUC18质粒（如图14所示）都用EcoR I和BamH I进行双酶切，然后用DNA连接酶进行连接，构建重组质粒。双酶切避免了目的基因与载体________连接，还减少了________的连接，提高了重组质粒的比例。

(3) 大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出β-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。

选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入_______物质。成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成______________颜色的菌落，原因是_____________________。之所以选择大肠杆菌作为基因工程的受体菌，其突出的优点是：___________________________________

(4) 从选择培养基中挑取所需的单个菌落接种于液体培养基中培养，获得粗提表达产物。将等量毛细血管内皮细胞接种于细胞培养板，37⁰C培养。将等量不同浓度的粗提表达产物加进培养孔中，72h后在显微镜下观察细胞存活情况并，______________实验结果如下表所示。

结果说明__________________________________________

(10分）研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂一内皮抑素，它能有效地抑制血管增生。下面是获得重组内皮抑素的方法，请分析回答下列问题：

(1) 从肝细胞中分离总RNA，经_________获得cDNA，之后经过_________扩增内皮抑素基因。
(2) 扩增的目的基因与PUC18质粒（如图14所示）都用EcoRI和BamH I进行双酶切，然后用DNA连接酶进行连接，构建重组质粒。双酶切避免了目的基因与载体________连接，还减少了________的连接，提高了重组质粒的比例。
(3) 大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出β-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。
选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入_______物质。成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成______________颜色的菌落，原因是_____________________。之所以选择大肠杆菌作为基因工程的受体菌，其突出的优点是：___________________________________
(4) 从选择培养基中挑取所需的单个菌落接种于液体培养基中培养，获得粗提表达产物。将等量毛细血管内皮细胞接种于细胞培养板，37⁰C培养。将等量不同浓度的粗提表达产物加进培养孔中，72h后在显微镜下观察细胞存活情况并，______________实验结果如下表所示。

结果说明__________________________________________

植物组织培养的过程如图14所示。请分析并回答：

（1）图中的A过程是＿＿＿＿＿＿＿，B、C过程是通过细胞＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿实现的。

（2）胚状体可根据其来源不同分为“体细胞胚”和“花粉胚”。用花药离体培养可获得“花粉胚”，同种植物的花粉胚与体细胞胚在染色体数目上的主要区别是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；如果用＿＿＿＿＿＿处理二倍体植物的花粉胚，能获得可育植株，该过程是＿＿＿＿＿＿＿育种中不可缺少的环节。 在一定条件下培养离体细胞可以形成“体细胞胚”进而发育成完整的植株，其根本原因是每个细胞都含有＿＿＿＿＿＿，这一过程体现了植物细胞的＿＿＿＿＿＿。

分析有关资料，回答有关遗传、基因工程问题。（13分）

油菜的株高由等位基因 G 和 g 决定，GG 为高杆，Gg 为中杆，gg 为矮杆。B基因是另一种植物的高杆基因，B 基因与 G 基因在油菜的株高上有相同的效果，并且株高与这两个基因的数量正相关。下图是培育转基因油菜的操作流程。请回答下列问题：

（1）步骤①中用到的工具酶是             ，培育转基因油菜主要运用了转基因技术和            技术。

（2）图中质粒是双链闭合环状的DNA分子，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶M和N切割，通过凝胶电泳分离分析得下表。限制酶M和N的识别序列和切割位点如图甲所示。

①该质粒的长度为___________kb。在该质粒中，M酶与N酶的切割位点分别有__________、         个。

②M酶与N酶切出的能相互粘连的末端在酶的作用下相互连接，请将连接的结果表示出来：____________。连接后的序列是否可以用M酶、N酶进行切割：_______________。

下图为B基因的结构示意图以及限制酶M和N的切割位点。

③现用图中基因作为目的基因，若采用直接从供体细胞中分离，可选用酶______来切割。

④已知Ⅱ区的碱基数是2000个，其中阴影区域碱基数是800个，空白区域中G和C的总数共有400个，则由该区转录的mRNA中A和U总数是               。

（3）若将一个 B 基因转移到矮杆油菜的染色体上并在植株中得到成功表达，且 B 基因与 g 基因位于非同源染色体上，这样的转基因油菜植株表现型为           。

（4）若将一个 B 基因转移到中杆油菜的染色体上并在植株中得到成功表达，培育了甲～丁四种转基因油菜（如下图）。

①与甲的株高相同的是         。四种转基因油菜分别自交，在不考虑交叉互换的前提下，子代有 3 种表现型的是              。

②另有一种转基因油菜自交子代也有3 种表现型，请在下图中的染色体上标出B 基因的位置。

植物组织培养的过程如图14所示。请分析并回答：

（1）图中的A过程是＿＿＿＿＿＿＿，B、C过程是通过细胞＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿实现的。
（2）胚状体可根据其来源不同分为“体细胞胚”和“花粉胚”。用花药离体培养可获得“花粉胚”，同种植物的花粉胚与体细胞胚在染色体数目上的主要区别是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；如果用＿＿＿＿＿＿处理二倍体植物的花粉胚，能获得可育植株，该过程是＿＿＿＿＿＿＿育种中不可缺少的环节。 在一定条件下培养离体细胞可以形成“体细胞胚”进而发育成完整的植株，其根本原因是每个细胞都含有＿＿＿＿＿＿，这一过程体现了植物细胞的＿＿＿＿＿＿。