已知二倍体番茄红果(A)对黄果(a)为显性，双子房(B)对多子房(b)为显性，高蔓(C)对矮蔓(c)为显性。现有三个纯系品种：Ⅰ（黄色、多子房、高蔓），Ⅱ（黄色、双子房、矮蔓），Ⅲ（红色、双子房、高蔓），为了快速获取红色、多子房、矮蔓纯系新品种。

（1）请完善以下实验步骤。

第一步：Ⅰ×Ⅱ→获得植株Ⅳ，让Ⅳ自交，从子代中选取黄色、多子房、矮蔓植株Ⅴ。

第二步：

第三步：

（2）将上述植株的离体细胞与的离体细胞融合，形成杂种细胞。

①促进融合时常采用的化学诱导剂是__________________________。

②请画出该融合细胞中控制红色与黄色这对性状的染色体组成图，并标明相关基因。

（3）据报道，番茄红素具有一定的防癌效果。科学家将含有酵母S—腺苷基蛋氨酸脱羧酶基因（简称S基因）cDNA片断导入普通番茄植株，培育了番茄红素高的新品种。

①获得cDNA片断的方法是____________________。

②假设S基因的一条链A和T的总量为2400个，占该片断总碱基的60%，用PCR扩增该基因，该基因复制n次共要dGTP_______________个。

③为确保S基因在番茄中表达，在构建基因表达载体时应插入特定的_________________。

④将基因表达载体导入番茄的方法有农杆菌转化法_____________和__________等。

已知二倍体番茄红果(A)对黄果(a)为显性，双子房(B)对多子房(b)为显性，高蔓(C)对矮蔓(c)为显性。现有三个纯系品种：Ⅰ（黄色、多子房、高蔓），Ⅱ（黄色、双子房、矮蔓），Ⅲ（红色、双子房、高蔓），为了快速获取红色、多子房、矮蔓纯系新品种。
（1）请完善以下实验步骤。
第一步：Ⅰ×Ⅱ→获得植株Ⅳ，让Ⅳ自交，从子代中选取黄色、多子房、矮蔓植株Ⅴ。
第二步：
第三步：
（2）将上述植株的离体细胞与的离体细胞融合，形成杂种细胞。
①促进融合时常采用的化学诱导剂是__________________________。
②请画出该融合细胞中控制红色与黄色这对性状的染色体组成图，并标明相关基因。
（3）据报道，番茄红素具有一定的防癌效果。科学家将含有酵母S—腺苷基蛋氨酸脱羧酶基因（简称S基因）cDNA片断导入普通番茄植株，培育了番茄红素高的新品种。
①获得cDNA片断的方法是____________________。
②假设S基因的一条链A和T的总量为2400个，占该片断总碱基的60%，用PCR扩增该基因，该基因复制n次共要dGTP_______________个。
③为确保S基因在番茄中表达，在构建基因表达载体时应插入特定的_________________。
④将基因表达载体导入番茄的方法有农杆菌转化法_____________和__________等。

（12分）下图是利用转基因技术生产干扰素的简化流程。请分析回答：

(1) 过程①使用的          酶能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的            （化学键）断开。运载体的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过                            而结合。 过程②需要用到         酶，

(2图中A的名称是____________，它重组成功的物质基础是__________________ __________的结构组成相同。

(3) A上应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动干扰素基因转录，该部位称为　　　　。为直接检测干扰素基因是否转录，可从细胞中提取　　　　__与用放射性同位素标记的____________作探针进行分子杂交，。

（4）利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根据这一序列合成            ，除了该物质和目的基因外，扩增仪中还需加入四种脱氧核苷酸和           酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式增长。

（5）在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是—G′GATCC—。

请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图

请回答基因工程方面的有关问题：

(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物为单链 DNA 片段，它是子链合成延伸的基础。

①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物 A 的 DNA 片段所占的比例为________。

②在第________轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的 DNA 片段。

(2)设计引物是 PCR 技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。

①第 1 组：________________________；

②第 2 组：________________________。

(3)PCR反应体系中含有热稳定 DNA 聚合酶，下面的表达式不能正确反映 DNA 聚合酶的功能，这是因为____________________________________________________________。

(4)用限制酶 EcoRV 、MboⅠ单独或联合切割同一种质粒，得到的 DNA 片段长度如下图(1 kb 即 1 000 个碱基对)，请画出质粒上 EcoRV 、MboⅠ的切割位点。