(6分)下图是动物细胞工程过程中相关的技术操作过程，请据图回答下列问题：

(1) 在操作一中，为了使细胞彼此分离，通常是先用剪刀剪碎组织，再用消化法将细胞分开，消化法用的消化酶是胰蛋白质酶，或胶原酶。研究表明胶原蛋白酶和胰蛋白酶在消化时的机制有差异，下表为两种酶活性的比较表。

　据表中信息可知胰蛋白质酶作用时间需限制在0.5～2小时，原因是____________________________________，为了控制胰蛋白酶的消化作用时间，常用消化临界时向溶液中直接加入________即可使酶灭活而终止消化。操作一的原理是__________________。

(2) 动物细胞培养液配制好后，通常还要先抽取少许放入培养瓶中，置于37℃、CO₂培养箱中24小时后观察，这样做的目的是__________________________。

(3) 在动物细胞培养过程中通常要对细胞进行计数，计数的细胞数应为活细胞数。某同学在细胞培养的一次测定中，首先振荡摇匀培养液并立即吸细胞悬液少数向一试管中滴入细胞悬液9滴，再滴入台盼蓝(活细胞染液)1滴，混匀。再从试管中取混合液向计数板边缘轻轻滴1～2滴已染色的细胞悬液，使之充满计数板和盖玻片之间间隙，经测定计数室每小格中活细胞数平均为3个，则原每毫升培养液中含有的活细胞数应为________个。

(4) 科研人员研究发现某一种抗原刺激机体后，在鼠体内可发现有多种效应B细胞都可产生针对于该特定抗原的抗体，这些抗体混合在一起即为多克隆抗体。试从抗原结构的角度分析产生该现象的原因是____________________________________。

下图一表示生物膜的结构（ABC表示组成成分）及物质进出膜的方式（用abc表示），图二表示某细胞在进行分泌蛋白的合成和分泌前三种生物膜的面积。请据图回答：

（1）若图一为小肠绒毛上皮细胞膜，则图中        表示钾离子的吸收过程。图中     表示氧气的吸收过程。
（2）在生物实验中，鉴定A成分通常选用的试剂是               。
（3）胰腺细胞分泌消化酶时是以酶原颗粒的形式分泌出去的，酶原颗粒在细胞内的加工场所是______        ___ 。
（4）请在图二中绘出细胞在进行分泌蛋白的合成和分泌后这三种生物膜的面积变化。
（5）将酶、抗体、核酸等生物大分子或小分子药物用磷脂制成的微球体包裹后，更容易运输到患病部位的细胞中，这是因为                               

Ⅰ、（12分）有一种病人不能抵抗疾病，只能生活在无菌室里，如果离开无菌室，就会受到病毒感染而死亡。原因是其体内缺乏一种腺苷酶基因。其治疗方案如右图所示。

（1）仿照上述方案设计一个为某男性患者治疗血友病的方案，请完成有关步骤：

第一步：取出患者的皮肤细胞进行细胞培养；

第二步：提取目的基因；

第三步：                              

第四步：将重组体（即重组DNA）导入受体细胞，即让这种携带有正常凝血因子基因的无害病毒去感染在体外培养的                   

第五步：根据病毒上的标记基因检测皮肤细胞是否导入了正常凝血因子基因，并检测是否产生了                  

第六步：将含有目的基因的皮肤细胞扩大培养，当各种指标达到要求后，再与胶原细胞混合，制成注射针剂。将含有这种活细胞的针剂注射到患者体内，并在患者体内表达，使患者的凝血因子达到可以止血的含量。

（2）基因工程中常用到的受体细胞有细菌、真菌和动植物细胞等，此处取患者本人的皮肤细胞作为受体细胞进行培养，是为了防止发生           。

（3）假设以大肠杆菌质粒作为运载体，并以同一种限制酶切割运载体与目的基因，将切割后的运载体与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶。两两片段间连接产物中至少有          种环状DNA分子。它们分别是                                   

                           。

Ⅱ、（10分）如图为高等动物细胞亚显微结构模式图。请据图作答：

（1）若此图示旺盛分泌肠液（含多种消化酶）的小肠上皮细胞，则其形态结构必然具有下列          （填序号）特点。

①细胞分泌面有较多的皱褶；②皱褶下和内质网附近分布着较多的线粒体；③细胞的内质网与高尔基体很发达；④细胞内核糖体丰富。

（2）如果该细胞是效应B细胞，培养在含放射性标记的某种氨基酸的培养基中，之后在产物中检测到带有放射性的抗体。放射性出现的先后顺序应该是           

（可供选择的物质和结构是①细胞核  ②核糖体  ③染色体  ④线粒体  ⑤内质网  ⑥细胞膜  ⑦中心体  ⑧高尔基体）

（3）若此图示衰老的细胞，除细胞核体积增大外，细胞膜发生的变化是                       

                      。

（4）右图为该细胞进行细胞分裂过程中不同时期的细胞图像，则该高等动物的性别是        ，其体细胞中染色体数目是          。

（共9分）有些蛋白质是在细胞内合成后，分泌到细胞外起作用的，这类蛋白质叫做分泌蛋白，如消化酶、抗体和一部分激素。科学家在研究分泌蛋白合成和分泌时，做过这样一个实验。他们在豚鼠的胰腺腺泡细胞中注射³H标记的亮氨酸，3min后，被标记的亮氨酸出现在附着有核糖体的内质网中，17min后，出现在高尔基体中；117min后，出现在靠近细胞膜内侧的运输蛋白质囊泡中，以及释放到细胞外的分泌物中。

1.分泌蛋白是在哪里合成的？          2.分泌蛋白从合成至分泌到细胞外，经过了哪些细胞器或细胞结构？尝试描述分泌蛋白的合成和运输过程。

3.分泌蛋白合成和分泌的过程中需要能量吗？能量由哪里提供？

下图一表示生物膜的结构（ABC表示组成成分）及物质进出膜的方式（用abc表示），图二表示某细胞在进行分泌蛋白的合成和分泌前三种生物膜的面积。请据图回答：

（1）若图一为小肠绒毛上皮细胞膜，则图中         表示钾离子的吸收过程。图中      表示氧气的吸收过程。

（2）在生物实验中，鉴定A成分通常选用的试剂是                。

（3）胰腺细胞分泌消化酶时是以酶原颗粒的形式分泌出去的，酶原颗粒在细胞内的加工场所是______         ___ 。

（4）请在图二中绘出细胞在进行分泌蛋白的合成和分泌后这三种生物膜的面积变化。

（5）将酶、抗体、核酸等生物大分子或小分子药物用磷脂制成的微球体包裹后，更容易运输到患病部位的细胞中，这是因为                                

A．生物膜具有选择透过性，能够允许对细胞有益的物质进入

B．磷脂双分子层是生物膜的基本骨架，且具有流动性

C．生物膜上的糖蛋白起识别作用   

D．生物膜具有半透性，不允许大分子物质通过

（6）脑部毛细血管中的红细胞所携带的O₂进入脑细胞内并被利用，至少需经    层生物膜。