回答下列有关基因工程的问题(10分)最新基因医疗工程主要选择腺相关病毒(简称AAV)作为治疗用基因载体(见图)。AAV是有衣壳、无包膜的DNA小病毒,基因组含有病毒衣壳基因rep和复制相关蛋白基因cap,以及其他基因,但缺乏复制激活基因E,所以,AAV感染细胞后不会复制,对人体安全。当人体细胞同时感染其他DNA病毒(含有基因E)后,会激活复制、表达,形成病毒粒子(含DNA和衣壳),病毒粒子具有侵染能力。AAV病毒衣壳不能包装较大DNA分子。

血友病是由于基因TPO突变而不能合成凝血因子,导致机体出血。目前血友病的临床治疗主要有两种基因疗法,一是将基因工程菌生产的凝血因子注入患者体内,补充凝血因子;二是用含目的基因的重组病毒感染患者,使患者获得病毒直接提供的凝血因子。

1.在质粒重组之前需获取大量的目的基因等,实验室最常见的方法是(写中文全称)

2.过程①②需要限制酶外,还需要 酶。

3.重组AAV中去除了基因rep、cap,此举的目的是 ;重组AAV转染细胞产生病毒粒子,需要人工重组辅助质粒,这是因为

4.比较两种基因治疗法,说出用重组AAV病毒粒子感染治疗的优点:

5.实验发现,用昆虫细胞、酵母菌、人体细胞承担重组质粒与重组AAV的转染,都能收集到凝血因子,这一现象说明

6.病毒粒子可能含有重组AAV或人工重组辅助质粒,就需要检验、提纯,检验可以用酶切结合电泳法。已知腺相关病毒(AAV)与人体DNA片段的EcoRI与BamHI的酶切位点如图30所示,两种酶分开切的电泳图如图所示。

则用这两种酶作用于重组AAV,电泳图正确的是

 

 0  86151  86159  86165  86169  86175  86177  86181  86187  86189  86195  86201  86205  86207  86211  86217  86219  86225  86229  86231  86235  86237  86241  86243  86245  86246  86247  86249  86250  86251  86253  86255  86259  86261  86265  86267  86271  86277  86279  86285  86289  86291  86295  86301  86307  86309  86315  86319  86321  86327  86331  86337  86345  170175 

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