图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题:

1.用图1中的外源DNA(含有目的基因D)和图2中的质粒构建重组质粒需要使用限制酶和 。前者(酶)的专一性很强,其作用特点是

2.应该使用限制酶BamH同时处理质粒、外源DNA,而不选择其他3种,原因在于( )。(多选)

A.若使用SmaⅠ或者MspⅠ会破坏目的基因

B.使用SmaⅠ切割质粒,能成功切开质粒得到粘性末端的可能很低

C.若使用MboⅠ切割质粒,质粒上会有2处被切开,会将质粒切成两段不利于筛选

D.使用限制酶BamHⅠ能保证目的基因和质粒获得相同的粘性末端,以便目的基因和运载体定向连接,不至于反向连接

E.使用BamHⅠ切割质粒,质粒上会有1处被切开,破坏抗生素A抗性基因,保留抗生素B抗性基因,以便于将来筛选含目的基因的受体细胞

F.只有使用BamHⅠ切割,才能保证质粒和目的基因上产生相同的粘性末端。

3.若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶Sma Ⅰ完全切割,产物中共有 种不同DNA片段。若同时用限制酶MspⅠ、MboⅠ切割图2中的质粒,则可得到 个DNA片段。

 

 0  86147  86155  86161  86165  86171  86173  86177  86183  86185  86191  86197  86201  86203  86207  86213  86215  86221  86225  86227  86231  86233  86237  86239  86241  86242  86243  86245  86246  86247  86249  86251  86255  86257  86261  86263  86267  86273  86275  86281  86285  86287  86291  86297  86303  86305  86311  86315  86317  86323  86327  86333  86341  170175 

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