胚胎工程是一项综合性的动物繁育技术，可在畜牧业和制药业等领域发挥重要作用。下图是通过胚胎工程培育试管牛的过程。

（1）从良种母牛采集的卵母细胞，都需要进行体外培养，其目的是________；从良种公牛采集的精子需________后才能进行受精作用。

（2）在体外培养受精卵时，除了给予一定量的O₂以维持细胞呼吸外，还需要提供________气体以维持________。

（3）图中过程A称为________，它在胚胎工程中的意义在于________。

（4）研制能够产生人类白细胞介素的牛乳腺生物反应器，需将目的的基因导入牛受精卵，最常用的导入方法是________；获得转基因母牛后，如果________即说明目的基因已经表达。

请回答胚胎工程和基因工程方面的问题：

（1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、________、________以及在母体中发育和产出等过程。

（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其________。另外，培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和________。

（3）通常奶牛每次排出一枚卵母细胞，采用激素处理可使其一次排出多枚卵母细胞，常使用的激素是________。

（4）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状。基因工程的四个基本操作步骤是________、基因表达载体的构建、________和________。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、________、________、________和复制原点等。将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是________（显微注射法、农杆菌转化法），为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是________（受精卵、乳腺细胞）。

随着人们生活水平的提高，乳制品需求越来越大，为了扩大生产，提高产崽率，要进行良种牛的培育。下图为胚胎移植的基本程序及早期胚胎发育过程，请据图回答：

（1）用________激素处理使供，受体母牛同期发情。

（2）冲卵实质上是用特定装置将供体母牛子宫内的________冲洗出来。

（3）从A到E中，适宜于牛的胚胎移植时期有________。

（4）图中标号3为________，它将来发育为胎膜和胎盘。

（5）若一次给受体母牛移入多个胚胎，产生的多个后代基因型相同吗？为什么？

________。

（6）若对A细胞利用基因工程技术加以改造，将人的血清白蛋白基因导入，在成体的雌牛的乳汁中提取出人血清白蛋白。该基因工程操作的基本步骤是

________。

（7）对于植物来说，导入外源基因，容易引起基因污染，科学家就将外源基因导入叶绿体或线粒体内，原因是________。

牛胚胎移植的基本程序如下图，请据图回答：

（1）图中a、b、c过程分别是指________、________、________。

（2）供体牛的主要职能是________；受体母牛必须具备________。

（3）为了提高牛胚胎的利用率，常采取的方法是________；处理的时期是________；理由是________。

（4）从哺乳动物早期胚胎或原始性腺中分离出来的细胞，称为ES或EK细胞。这类细胞的形态特征有________。

（5）你认为胚胎移植技术在生产实践中的主要意义有哪些？

________。

下图是单克隆抗体制备的流程图。

（1）________技术是单克隆抗体技术的基础。?

（2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于________培养基。

（3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是________。

（4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用________。

（5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的________特点，又具备淋巴细胞的________特点。?

（6）淋巴细胞是由动物体________中的________细胞分化、发育而来。

（7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是________。

科学家从悬浮培养的单细胞、离体花粉或胚囊中，通过植物组织培养技术获得胚状结构（胚状体），胚状体不同于一般的种子胚，是由非合子细胞分化形成的类似于胚的结构物，所以，又称“体细胞胚”或“花粉胚”。胚状体在一定的条件下，可以通过个体发育过程形成植株。将其包埋在一个能提供营养的胶质中，外包裹上人造种皮，便制成了“人工种子”。人工种子的概念是1978年在加拿大举行的第四届国际植物组织、细胞培养会议上首次提出来的。目前，我国科学家利用植物组织培养技术已在烟草、水稻、小麦和玉米等植物上成功诱导出胚状体，而美、日、法等各国正着手将人工种子市场化、商品化。

（1）简要归纳“离体的细胞”进行植物组织培养获得胚状体的过程________。

（2）“人工种子”大体由胚状体，包埋胚状体的胶质以及人造种皮等3部分组成。包埋胚状体的胶质中富含营养物质，这是因为________。

为了满足胚状体代谢的需求，“人造种皮”则必须具有良好的________性能。

（3）由“人工种子”萌发出的植株是否可育？

________________。

（4）写出“人工种子”商品化的意义（两项）

________________。

（5）培育胚状体利用了________这一项生物技术。在该过程中培养基中需要添加________和________两种激素，还需要对培养基进行严格的________。

（6）利用人工种子繁殖后代属于________。

（7）该项技术的成功应用，体现了细胞的________性。

有性生殖的生物产生后代需经过受精作用，植物体细胞杂交要进行原生质体融合，单克隆抗体的制备需进行动物细胞融合，可见细胞融合技术有着广泛的应用。下列为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题：

（1）若a、b表示两种植物体细胞，则由d细胞形成杂种植株的原理是________，这种育种方法的优点是________。

（2）若a、b分别为骨髓瘤细胞和浆细胞，则d细胞特点是________。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较，具有________的特点。生产上，一般不能通过直接培养浆细胞来生产单克隆抗体，其主要原因是________。

（3）下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来。顺序是________。

通过DNA重组技术使原有基因得以改造的动物称为转基因动物。运用这一技术可使羊奶中含有人体蛋白质，下图表示这一技术的基本过程，在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是－G^↓GATCC－，请回答：

（1）从羊染色体中“剪下”羊蛋白质基因的酶是________，人体蛋白质基因“插入”后连接在羊体细胞染色体中需要的酶是________。

（2）请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图。

（3）人体蛋白质基因之所以能连接到羊的染色体DNA中，原因是________，人体蛋白质基因导入羊细胞时常用的工具是________。

（4）此过程中目的基因的检测与表达中的表达是指________。

（5）你认为此类羊产的奶安全可靠吗？理由是什么？

________。

农业科技工作者在烟草中找到了一抗病基因，现拟采用基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题：

（1）要获得该抗病基因，可采用________、________等方法。为了能把该抗病基因转入到棉花细胞中，常用的运载体是________。

（2）要使运载体与该抗病基因连接，首先应使用________进行切割。假如运载体被切割后，得到的分子末端序列为，则能与该运载体连接的抗病基因分子末端是________

A．

B．

C．

D．

（3）切割完成后，采用________将运载体与该抗病基因连接，连接后得到的DNA分子称为________。

（4）再将连接得到的DNA分子导入农杆菌，然后用该农杆菌去________棉花细胞，利用植物细胞具有的________性进行组织培养，从培养出的植株中________出抗病的棉花。

（5）该抗病基因在棉花细胞中表达的产物是________

A．淀粉

B．脂类

C．蛋白质

D．核酸

（6）转基因棉花获得的________是由该表达产物来体现的。

目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示。

（1）构建人工质粒时要有抗性基因，以便于________。

（2）pBR322分子中有单个EcoRⅠ限制酶作用位点，EcoRⅠ只能识别序列－GAATTC－，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

（3）pBR322分子中另有单个的BamHⅠ限制酶作用位点，现将经BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复________键，成功地获得了重组质粒。说明________。

（4）为了检测上述重组质粒是否导入原本无amp^R和tet^R的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果（空圈表示与图二对照无菌落的位置）。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是________，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是________。