回答有关生物工程的问题。

小鼠是实验室常用的实验动物,如:利用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体、利用小鼠进行DNA重组研究中导致了“基因敲除”技术的出现。

用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体。

(1)将小鼠等分为两组,甲组定期间隔注射适量的含X病毒的溶液,其目的是________;乙组注射________(作对照)。

(2)为了保存有价值的杂交瘤细胞系,通常用超低温将其冻存,请分析其原因________。

用小鼠进行DNA重组研究中形成的“基因敲除”技术,能“敲除”DNA分子上的特定基因。该技术的主要过程如下:

第一步:分离小鼠胚胎干细胞,这些细胞中含有需要改造的基因,称“靶基因”。

第二步:获取与“靶基因”同源的DNA片断,利用特定技术在该DNA片段上插入neoR基因(新霉素抗性基因)成为突变DNA(如下图),使该片段上的靶基因失活。

第三步:将插入neoR基因(新霉素抗性基因)的靶基因转移入胚胎干细胞,再通过同源互换,用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个,完成对胚胎干细胞的基因改造。

第四步:将第三步处理后的胚胎干细胞,转移到特定培养基中筛选培养。

其基本原理下图所示:

(3)第二步中neoR基因插入靶基因使用的工具酶是________。neoR基因不仅能使靶基因失活,还可作为________;“靶基因失活”的根本原因是________

(4)从研究者成功获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞,到将该细胞培育成“基因敲除”小鼠,运用到的生物技术有________________等。

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