下图一为含有目的基因的DNA(外源DNA),图二为某质粒,表中是几种限制酶识别序列及其切割位点。用图中的外源DNA与质粒构建重组质粒。
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限制酶 |
BamHⅠ |
SmaⅠ |
EcoRⅠ |
Hind Ⅲ |
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识别序列及切割位点 |
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请根据上述信息分析回答:
55、外源DNA、质粒分别有_______、_______个游离的磷酸基团。
56、DNA分子的一条多核苷酸链中,两个脱氧核苷酸之间以_________和_________相连。用SmaⅠ限制酶切割外源DNA,切开的是___________和__________之间相连的键。
57、如果用SmaⅠ酶切割外源DNA和质粒来重组质粒,其结果是_____________。
58、如果使用EcoRⅠ酶切割外源DNA和质粒,将目的基因片段与切割后的质粒混合,加入_________酶,获得的环状DNA可能有哪几种情况?______________。
59、如果使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理外源DNA和质粒,比用EcoRⅠ酶切割的优点是_____________________。
60、将重组质粒导入大肠杆菌中,培养基中需加入___________进行鉴别和筛选含有___________的细胞。
生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇,其技术流程为:纤维素酶分解→酵母菌发酵→蒸馏→成品。如果向含有纤维素培养基中加入刚果红染液时,刚果红会与纤维素形成红色复合物,而呈现红色,如果纤维素被降解,则培养基表面会形成以纤维素分解菌为中心的透明圈。 请分析回答下列问题:
71、纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维素分解菌的实验流程:土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。
①最好选择 环境采集土样。
②配置培养基时,各种成分在熔化后分装前必须进行 ,接种前要进行 。在整个微生物的分离和培养中,一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时,平板冷凝后,应将平板倒过来放置,这样做的目的是 。
③以下是两种培养基配方:
A培养基配方:
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KH2P04 |
Na2HP04 |
MgS04.7H20 |
纤维素酶 |
葡萄糖 |
尿素 |
琼脂 |
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1.4g |
2.1g |
0.2g |
1g |
10.0g |
1.0g |
15.og |
B培养基配方:
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KH2P04 |
NaN03 |
Na2HP04.7H20 |
MgS04.7H20 |
KCl |
纤维素粉 |
酵母膏 |
水解酪素 |
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0.9g |
lg |
1.2g |
0.5g |
0.5g |
5g |
0.5g |
0.5g |
如果要分离提纯土壤中的纤维素分解菌,应选择 (填编号) 培养基配方,从功能看该培养基属于 培养基。
④为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种,可以在鉴别培养基中加入刚果红染液,将筛选获得的菌液稀释后用 法接种到鉴别培养基上,然后挑选产生 的菌落作为菌种进行扩大培养。
72、进行工业化酶解时,为了使纤维素酶能反复使用,可以采用酶固定化技术,其具体方法包括如下图所示的三种,则①表示 、②表示 、③表示载体结合法。
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