（10分）．下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
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限制酶 |
BamHⅠ |
HindⅢ |
EcoRⅠ |
SmaⅠ |
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识别序列 及切割位点 |
↓ GGATCC CCTAGG ↑ |
↓ AAGCTT TTCGAA ↑ |
↓ GAATTC CTTAAG ↑ |
↓ CCCGGG GGGCCC ↑ |
(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有____，____个游离的磷酸基团。
(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是___________
________________________________________________________________________。
(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止___________________________________________________________。
(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。
(6)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在_________________________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
(18分).植物叶肉细胞原生质体的分离和培养的主要过程可用下图所示图解简单表示：
（1）科学家所用的这种生物技术叫做______________________。该技术表明，当植物细胞处于离体状态时，在一定的营养物质、___________（至少回答2种）等植物激素和其他外界条件的作用下，可能表现出___________，发育成完整植株。
(2)图中“酶解”所用的酶应该包括___________和___________。
(3)原生质体的结构包括________________三部分构成。
（4）图中c过程称为___________。通过c过程产生的愈伤组织细胞与根韧皮部细胞形态结构___________（相同/不同），其根本原因是______________________。
(5)一般在培养基上培养24～48小时后，大部分原生质体已再分
生出细胞壁。可以取样，利用25％的蔗糖溶液以及其他用具，通过______________________实验来鉴别细胞壁是否已经再生。
（6）某课外小组同学用愈伤组织同时进行了两组实验：甲组培养基中含3%的蔗糖，乙组培养基中不含蔗糖，经灭菌后接种，每组实验再分成两个小组，分别在光下和暗处培养。1个月后，观察植物体生长、分化情况，结果如下表：
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培养条件 |
甲组 |
乙组 |
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光下 |
正常生长，分化 |
不生长，死亡 |
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暗处 |
正常生长，不分化 |
不生长，死亡 |
由此得出的结论是：①______________________；②______________________。
(7)从叶片的叶肉细胞到获得胚状体的过程中，需要经过（ ）
①无丝分裂 ②有丝分裂 ③减数分裂 ④原代培养 ⑤传代培养 ⑥植物体细胞杂交 ⑦细胞融合 ⑧脱分化 ⑨再分化
A．①④⑤⑦⑧ B. ②④⑤⑥⑧⑨ C．②⑧⑨ D．③⑥⑧⑨
(8)从图解可知，可在避光条件下进行的是___________ (用字母a～e回答)阶段，若为了获得三七的细胞产物，则只需培养到___________。若为了获得三七的人工种子，则需要培养到___________。
