现代生物科技在畜牧业生产中有着广泛的应用,以下是科学家采用不同方法培育良种牛的过程,a -- h为操作过程,请据图回答有关问题。

(1)为提高良种奶牛的繁殖能力,在获取卵母细胞之前需用                对奶牛进行处理,目的是使其               

(2)“转基因牛”D培育过程中,常用受精卵作为外源基因的受体细胞,其主要原因是

                                    。过程h常用的方法是                    。h过程的核心步骤是                                    ,该步骤需要的工具酶是

                              。为了能确定目的基因已经导入到受精卵,相应的载体需要有              以便于进行检测。在蛋白质水平检测目的基因的表达通常采用的方法是                         

(3)“试管牛”技术的操作流程是                    。(用图中字母和箭头形式表示)

(4)图中数字标号③代表的结构为             ,c→d过程需对其均等分割的目的是

                                           

(5)d操作的名称是              。 若要获得遗传物质完全相同的两个新个体,可对发育到                  阶段的早期胚胎进行               处理,再植入到受体内。若要对早期胚胎进行长期保存,应将其置于                条件下。

(6)受体母牛必须和供体牛属于同一物种。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是                                                     

(7)在培育良种牛的过程中,都运用了动物细胞培养技术.在动物细胞培养过程中,为防止杂菌的污染而要加入一定量的           

 

下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料,请分析回答下列问题。

【资料1】巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌,能将甲醇作为其唯一碳源,此时AOX1基因受到诱导而表达【5’AOX1和3’AOX1(TT)分别是基因AOX1的启动子和终止子】。

【资料2】巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒,所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体,其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组,将目的基因整合于染色体中以实现表达。

(1)如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组,应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上                         限制酶识别序列, 这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化。

(2)酶切获取HBsAg基因后,需用                将其连接到pPIC9K质粒上,形成重组质粒,并将其导入大肠杆菌以获取               

(3)步骤3中应选用限制酶            来切割重组质粒获得重组DNA,然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。

(4)为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功,在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选,转化后的细胞中是否含有HBsAg基因,可以用                    方法进行检测。

(5)转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后,需要向其中加入            以维持其生活,同时诱导HBsAg基因表达。

(6)与大肠杆菌等细菌相比,用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞,其优点是在蛋白质合成后,细胞可以对其进行                并分泌到细胞外,便于提取。

 

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