单克隆抗体制备过程中所用的骨髓瘤细胞是一种基因缺陷型细胞，其合成核酸的途径能被氨基喋呤阻断。现将从预先注射了某种抗原的小鼠脾脏中获得的B淋巴细胞与上述骨髓瘤细胞混合，加入PEG促融后，再加入含氨基喋呤的培养液。若将这些混合物分装于细胞培养板的小孔中培养（如右图所示），则小孔中的培养物不可能出现的结果是

   A．没有活细胞，产生抗体

   B．没有活细胞，不产生抗体

   C．细胞分裂繁殖，产生抗体，专一性抗体检验呈阴性

   D．细胞分裂繁殖，产生抗体，专一性抗体检验呈阳性

1970年，特明和巴尔德摩证实了RNA病毒能依赖RNA合成DNA的过程，并发现了催化此过程的酶。下面为形成cDNA的过程和PCR扩增过程示意图。请根据图解分析，下列说法不正确的是(　　)

A．催化①过程的酶是逆转录酶

B．从图示可以看出要将碱基对之间的氢键断开可以用核酸酶H和高温处理

C．从图中信息分析可知，②⑤过程为DNA复制，催化⑤过程的酶能耐高温

D．如果RNA单链中有碱基100个，其中A占25%，U占15%，则通过该过程合成的一个双链DNA片段中有胞嘧啶30个

（20分）利用动物乳腺生产产品的技术称为动物乳腺反应器技术。2005年青岛“崂山奶山羊乳腺生物反应器的研制”项目通过鉴定，该项目生产的药用蛋白具有表达效率高、成本低、安全性高、易于分离纯化的优点，可产生乙肝表面抗原及抗凝血酶Ⅲ等医药产品，造福人类健康。下图为利用生物技术获得生物这一新品种和抗虫棉的过程，据图回答：

（1）在基因工程中，A表示             ，B表示                    。

（2）基因表达载体的构建是基因工程的核心，在构建过程中需要的工具有             

                                 ，一个完整的基因表达载体至少包括哪些部分       

                                                    。

（3）在②过程中一般采用                 技术将目的基因导入受体细胞，一般选用山羊的           作为受体细胞，通常采用                      技术检测外源基因是否插入了山羊的基因组，在研制乳腺生物反应器时，应使外源基因在小鼠的             细胞中特异表达。

（4）将目的基因导入棉花细胞中一般是采用               方法，要确定目的基因导入成功后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体水平上的鉴定过程

                                                                         。

（7分）回答下列有关动物细胞培养的问题：

（1）取胚胎或幼龄动物的器官或组织剪碎，分散成单个细胞，制成              ，放入培养瓶内，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的　　　　 　　　，这种培养称为                ，要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是　　　    　　　　。

（2）随着细胞分裂次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现　　        　　现象；现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是　　　        　                      　　　　　。

（3）动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有                       。

（5分）叶肉细胞原生质体的分离和培养的主要过程可以用下面的图解简单表示，根据图解完成问题：

叶片

          ↓洗净、灭菌、切条、酶解

原生质体悬浮液

          ↓过滤、离心

纯净的原生质体

          ↓DPD培养基中培养

愈伤组织

（1）图解中“酶解”所用的酶应该包括                               。

（2）原生质体的结构由                                       三部分组成。

（3）DPD培养基的成分中，除了各种营养成分外，还必须含有                    才能诱导获得愈伤组织。

（4）获得原生质体后，需要对其活力进行检查，下列哪种实验最适合?_________。

A.观察原生质体的结构是否完整      B.观察细胞质流动

C.观察细胞的有丝分裂              D.观察叶绿体数目的多少

（5）一般在培养基上培养24～48小时后，大部分原生质体已再生出细胞壁。可以通过取样，利用25%蔗糖溶液以及其他用具，通过                            实验来鉴别细胞壁是否已经再生。

（10分）右图是某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：

(1)该方案不能达到预期效果原因是：                                  。

(2)图中②为              过程，常用                  作为诱导剂。

(3)图中③表示用特定的选择性培养基进行细胞培养，目的是                                 。

 (4)图中④过程，能获得足够数量的杂交瘤细胞，便于大规模培养，该细胞既具有骨髓瘤细胞的               特点，又具备淋巴细胞的              特点，由该细胞产生的抗体称为                    。该抗体与常规抗体相比，具有                  特点。

 (5)破伤风杆菌的抗体最终可从                 和                 中提取。

（11分）现有A和B两个肉牛品种，A品种牛的细胞组成可表示为A细胞核、A细胞质，B品种牛则为B细胞核、B细胞质。

（1）如果要获得一头克隆牛，使其细胞由A细胞核和B细胞质组成，基本步骤是，从A品种牛体内取出体细胞，进行体外培养。然后再从培养细胞中取出            注入B品种牛的          卵母细胞，经过某处刺激和培养后，可形成胚胎，该胚胎被称为             ，将该胚胎移入代孕母牛的        中，通过培育可达到目的。

（2）克隆牛用到的生物技术有              、                   （写出其中2种）

（3）克隆牛的产生说明                具有全能性。利用克隆技术培育良种牛时，如果多个供体细胞来自同一头牛，培育出的多个牛犊个体在性状上也不完全相同，分析其原因，下列正确的是         （多选）

A．性状变异可由环境条件引起         

B．基因可能会发生突变

C．受体细胞的细胞质基因不同         

D．细胞核基因发生了重组

（4）由A、B两品种杂交得到的牛与克隆牛相比，杂交牛细胞核的遗传物质来自      个亲本，细胞质来自     性亲本，克隆牛和杂交牛的遗传物质组成        （相同，不同）。

（11分）“白菜——甘蓝”是用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长期短和耐储藏等优点。下图是“白菜——甘蓝”的培育过程示意图，他们的基因型分别为AaBB、ccDd，请回答下列问题：

（1）上述过程所利用的植物细胞工程的技术手段有                          和

                                      。

（2）过程③的诱导方法有物理法和化学法两大类过程。若用化学法，所用化学试剂名称　　　       ，实际融合过程中原生质体可能会形成        种融合细胞（只考虑两个细胞融合的情况），请写出杂种细胞的基因型                　

（3）白菜和甘蓝细胞融合完成的标志是                       ，与此过程密切相关的细胞器是                。⑤过程中进行的细胞分裂方式是               。

（4）已知白菜细胞中含2M条染色体，甘蓝细胞中含有2N条染色体，则杂种植株体细胞染色体数为　　            。通常情况下，白菜和甘蓝有性杂交是不能成功的，原因是　　　                   　   ，若对白菜和甘蓝采用杂交育种方法能成功的话，得到的后代应含                条染色体。

（6分）动物器官的体外培养技术对于研究器官的生理、病理过程及其机制意义重大。下图是一个新生小鼠的肝脏小块培养装置示意图。请回答下列问题。

(1)肝脏切成小薄片，这有利于肝脏细胞                                     。

(2)气室中充入5％ C0₂气体的主要作用是                                  。

(3)培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长，但要注意选择抗生素的               ，以保证抗生素对肝脏无害。

(4)有机物X有毒性，可诱发染色体断裂。利用上图所示装置和提供的下列材料用具，探究肝脏小块对有机物X是否具有解毒作用。

材料用具：肝脏小块，外周血淋巴细胞，淋巴细胞培养液，植物凝集素(刺激淋巴细胞分裂)；显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，滴管；吉姆萨染液(使染色体着色)，有机物X溶液等。

实验过程：

①在淋巴细胞培养液中加入植物凝集素培养淋巴细胞，取4等份，备用。

②利用甲、乙、丙、丁4组上图所示装置，按下表步骤操作(“√”表示已完成的步骤)。

上表中还需进行的操作是                                                。

③培养一段时间后，取4组装置中的等量培养液，分别添加到4份备用的淋巴细胞培养液中继续培养。

④一段时间后取淋巴细胞分别染色、制片。在显微镜下观察                       ，并对比分析。若丙组淋巴细胞出现异常，而甲组的淋巴细胞正常，则说明               。

下列有关细胞的叙述中，正确的是

A．内质网与细胞膜中蛋白质和磷脂等成分的更新有关

B．酵母菌细胞内的mRNA只能在细胞核和线粒体中合成

C．处于分裂期的细胞不进行DNA的复制和蛋白质的合成

D．人体内精细胞变成为精子的过程不属于细胞分化的过程