T-DNA可能随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下:种植野生型拟南芥,待植物形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的T-DNA上带有抗除草剂基因)悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养,收获种子(称为T1代)。

环状DNA示意图

A、B、C、D表示能与相应T—DNA链

互补、长度相等的单链DNA片段;

箭头指示DNA合成方向。

    (1)为筛选出已转化的个体,需将T1代播种在含          的培养基上生长,成熟后目交,收获种子(称为T2代)。

(2)为筛选出具有抗盐性状的突变体,需将T2代播种在含          的培养基上,获得所需个体。 

    (3)经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起,需将该突变体与          植株进行杂交,再自交          代后统计性状分离比。

    (4)若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失,从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性         

    (5)根据T-DNA的已知序列,利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。

其过程是:提取          植株的DNA,用限制酶处理后,再用          将获得的DNA片段连接成环(如下图)。以此为模板,从图中A、B、C、D四种单链DNA片断中选取          作为引物进行扩增,得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。

 

 0  53237  53245  53251  53255  53261  53263  53267  53273  53275  53281  53287  53291  53293  53297  53303  53305  53311  53315  53317  53321  53323  53327  53329  53331  53332  53333  53335  53336  53337  53339  53341  53345  53347  53351  53353  53357  53363  53365  53371  53375  53377  53381  53387  53393  53395  53401  53405  53407  53413  53417  53423  53431  170175 

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