7．（5分）回答下列有关基因工程的问题。

(1)四种质粒含有El和E2两种限制酶的识别位点，表示抗青霉素的抗性基因，表示抗四环素的抗性基因，这四种质粒除抗性基因外长度相等。若将两端用E1切开的基因与用El切开的质粒X-l混合连接，连接后获得的质粒类型有_________。（多选）

A. X-1        B. X-2        C. X-3        D. X-4

(2)若将上图所示Xl、X-2、X-3、X-4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这两种培养基上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有_________、___________.

(3)如果X-1，用El酶切，产生850对碱基和3550对碱基两种片断：那么质粒(X-2基因的

长度为1200对碱基）用E2酶切后的片段长度为___________对碱基。

(4）若将外源的基因两端用E2切开，再与用EZ切开的。x-1混合连接，并导入大肠杆菌细胞，结果显示，含X-4的细胞数与含X-I的细胞数之比为1：3，增大DNA连接酶用量能否提高上述比值？____________。

6．（12分）多聚半乳糖醛酸酶(PG)，能降解果胶使细胞壁破损。番茄果实成熟中，PG合成显著增加，能使果实交红变软，但不利于保鲜，可利用基因工程的方法以其进行改造。请据图l回答：

提取目的基因

①若已获取PG的mRNA，可通过______获取PG基因。

②在该基因上游加结构A可确保基因的反义转录，结构A上应具有________酶结合位点。得到的目的基因两侧需人工合成BamHI黏性末端。已知BamHI的识别序列如图2-甲所示，请在图2-乙相应位置上，画出目的基因两侧的黏性末端。

③重组质粒转化到大肠杆菌中的目的是_____________________________________.

(2)用含目的基因的农秆菌感染番茄原生质体后，可用培养基进行筛选。培养24-48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞__________现象来鉴别细胞壁是否再生。

(3)由于导入的目的基因能转录反义RNA，且能与_____________互补结合，抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄__________，则可确定转基因番茄成功。

(4)获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用__________技术手段使子代保持转基因的优良性状。

(5)改造过程需要的工具酶有_______________，如果在此过程中形成的是平末端，则起“缝合作用的酶是_________________________.

(6)在构建基因表达载体时，除了插入目的基因外，基因表达载体中还需含有___________，在该番茄薪品种的培育过程中，将目的基因导入受体细胞的方法叫做___________。

（4分）转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有Pst I、Sma I、EcoRI、Apa I等四种限制酶切割位点。请回答：

1)构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶____________，对____________进行切割。

2)培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有_________，作为标记基因。

3)图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的_______________________过程。

4．（6分）胚胎工程技术包含的内容很丰富，如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，其中供体l是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是黄牛，请据图回答下列问题；

l)应用1中获得的小牛，其遗传物质来源于_________，为一次获得多个细胞B，往往需要向

共体2内注入的是促性腺激素，而不是性激素，原因是________________________.

2)通过应用2获得小牛，涉及到胚胎工程的最后一道“工序”是________________.

3)应用3中的细胞D取自囊胚的_______，细胞C取自牛胎儿的________________.

4)应用4中获得二分胚①和②，移植到受体牛中得到两只小牛，两只小牛的性别是_________

的（“相同”或“不同”）。

3．（8分）2n/4n嵌合体胚胎是指用四倍体(4n)胚胎与二倍体胚胎(2n，或胚胎干细胞(ES细胞）进行聚合，形成由二倍体和四倍体细胞组成的嵌合体。2n/4n嵌合体胚胎的构建常用方法如下图，请据图分析回答：

(l)受精卵是胚胎发育的开端，图中的卵母细胞达到_________时期，才具备受精的能力，而精子需经过___________过程才能和卵母细胞结合，

(2)2N的ES细胞来自胚胎发育过程的__________期，本实验中从功能上说明了该细胞________

(3)2n/4n嵌合体胚胎的构建用到的现代生物工程技术主要有：____________________

(4)ES细胞经嵌合体方法培育的动物与核移植方法培育的动物相比，遗传物质来源的区别主要是什么？_______________________________________

2．（6分）人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答问题。

(1)制各单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于_________，使小鼠产生分泌相应__________的淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的____________免疫。

(2)在细胞内DNA的合成一般有两条途径，主途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基瞟呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌岭和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化作用合成DNA,而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。

①利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的________

成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。

②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是_______________________________________。

(3)此过程生产的单克隆抗体可以与_________。特异性结合，从而诊断早孕。

1．（6分）下图列举了几种植物的育种方式，请据图回答相关问题。

(l)（甲+丁）育种方式称为_______________________________________________

(2)通过丁种方式可以获得脱毒苗，培养过程中c常常取用茎尖的原因是______________。

(3)乙方式通常用射线处理植物的愈伤组织能获得较好效果，原因是___________________。

(4)若a为白菜体细胞，b为甘蓝体细胞，通过（甲+丁）方法培育出的新植株既有白菜生长期短的优点，又有甘蓝易于储存的特性，从分子水平来说，这是由于_____________。

(5)通过甲、丁方法培育出的新植物体能结种子，是因为______________________。

(6)甲、丙两种育种方式与传统杂交育种相比，其优点是___________________。

50．北极比目鱼中有抗冻基因。慕编码的抗冻蛋白的氨基酸序列中某区域为11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是（　　）

A．过程①获取的目的基因，可用于基因工程中对比目鱼基因组测序

B．将多个抗冻基因编码区依次相连成新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白

C．过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选

D．应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达

49．英国科学家利用生物工程技术，发明了～种名为“我的皮肤”的生物活性绷带，为皮肤烧伤病人带来福音。该活性绷带的原理是先采集一些细胞标本，再让其在特殊膜片上增殖，5~7天后，将膜片敷到患者伤口上，膜片会将细胞逐渐“释放”，到伤口处，并促进新生皮肤层生长，达到愈合伤口的目的。下列有关叙述中，不正确是( )

A．人的皮肤烧伤后容易引起感染，主要是由于非特异性免疫机能受损导致的

B．种植在膜片上的细胞样本最好选来自本人的干细胞

C．膜片能否将细胞顺利“释放”到伤口与患者自身皮肤愈合，与两者细胞膜上的糖蛋白有关

D．若采用异体皮肤移植会导致排异反应，主要是由于机体特异性免疫产生相应的抗体

48．右图为细胞融合的简略过程（只考虑两个细胞的融合）。若A、B分别是基因型为Hhrr、hhRr的两个烟草品种的花粉，且这两对基因分别位于两对同源染色体上，由于一对隐性纯合基因(rr或hh)的作用，在光照强度大于8001x时，都不能增殖。下列叙述中正确的是

①实验开始时必须用纤维素酶和果胶酶除去不利于质生质体融合的物质

②要想从融合细胞的培养液中分离出基因型为HhRr的杂种细胞，可在大于800 lx光照下培养，收集增殖分化的细胞团

③从理论上分析考虑，将融合细胞的培养液放在夫干800lx光照下培养，有3种基因型的融合细胞不能增殖分化

A．①②③

B．②③

C．①②

D．①③