肺细胞中的let一7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let一7基因导入肺癌细胞实现表达增强后,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。
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(1)进行过程①时,需用_______________酶切开载体以插入let一7基因。进行过程②时,需用_______________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于细胞培养。采用PCR技术扩增let一7基因时,在PCR反应体系的主要成分应包含:扩增缓冲液(含Mg2+)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高温的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等,若在该反应体系中,目的基因扩增了5代,则具有引物I的DNA所占的比例理论上为_______________。
(2)研究发现,let一7基因能影响癌基因RAS的表达,其影响机理如图2。据图分析,可从细胞中提取_______________进行分子杂交,以直接检测1et一7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中_______________(RASmRNA/RAS蛋白质)含量减少引起的。
(3)现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子,用限制酶切开后得到仍是长度为1000 bp的DNA分子,说明此DNA分子的形态为______________________________。
(4)某线性DNA分子分别用限制酶Hind Ⅲ和Sma I处理,然后用这两种酶同时处理,得到如下片段(kb为千个碱基对):
| 限制酶 | 片段及长度 |
| Hind Ⅲ | 2.5 kb,5.0 kb |
| Sma I | 2.0 kb,5.5 kb |
| Hind Ⅲ和Sma I | 2.5 kb,3.0 kb,2.0 kb |
可以推知限制酶Hind Ⅲ和Sma I在此DNA分子中分别有_______________个识别序列。两酶同时处理后得到的片段,再用限制酶EcoR I处理,结果导致凝胶上3.0 kb的片段消失,产生一种1.5 kb的新片段;那么如果用限制酶HindⅢ和EcoR I将该线性DNA分子进行切割,则可得到长度分别为_______________的片段。
下表是不同浓度的油菜素内酯水溶液对芹菜幼苗生长影响的实验结果
| 组别 | 清水 | 浓度a | 浓度b | 浓度c | 浓度d | 浓度e |
| 平均株高(cm) | 16 | 20 | 38 | 51 | 42 | 24 |
(1)该实验结果能否说明油菜素内酯对芹菜生长具有两重性?________________,
理由是__________________________________________________________________。
(2)请完善进一步探究油菜素内酯促进芹菜生长的最适浓度范围的实验步骤:
①__________________________________________________________________;
②取同一批种子使其萌发,从中选取株高、长势相同的芹菜幼苗____________________;
③分别__________________________________________________喷洒对应组的芹菜幼苗;
④在相同且适宜的条件下培养一段时间后,_________________________________。