T-DNA可能随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下:种植野生型拟南芥,待植物形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的T-DNA上带有抗除草剂基因)悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养,收获种子(称为T1代)。

(1)为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾,需要去除    ,因为后者产生的

    会抑制侧芽的生长。

(2) 为筛选出已转化的个体,需将T代播种在含    的培养基上生长,成熟后自交,收获种子(称为T代)。

(3) 为筛选出具有抗盐性状的突变体,需将T代播种在含    的培养基上,获得所需个体。

(4)经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起,需将该突变体与   植株进行杂交,再自交    代后统计性状分离比。

(5)若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失,

从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性   

(6)根据T-DNA的已知序列,利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。

其过程是:提取   植株的DNA,用限制酶处理后,再用    将获得

的DNA片段连接成环(如右图)以此为模板,从图中A、B、C、D四种单链

DNA片断中选取  作为引物进行扩增,得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。

 

 0  28935  28943  28949  28953  28959  28961  28965  28971  28973  28979  28985  28989  28991  28995  29001  29003  29009  29013  29015  29019  29021  29025  29027  29029  29030  29031  29033  29034  29035  29037  29039  29043  29045  29049  29051  29055  29061  29063  29069  29073  29075  29079  29085  29091  29093  29099  29103  29105  29111  29115  29121  29129  170175 

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