Taq DNA聚合酶是从一种嗜热细菌中分离提取的,该菌是1966年从美国黄石国家森林公园的一个热泉中发现的。实验表明,PCR反应时变性温度为95 ℃,50个循环后,Taq DNA聚合酶仍有65%的活性。Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR的前提条件,也是PCR技术能迅速发展和广泛应用的原因。Taq DNA聚合酶还具有逆转灵活性,其作用类似于逆转录酶。Taq DNA聚合酶表现为Mg2+依赖,该酶的催化活性对Mg 2+浓度非常敏感。测定结果为MgCl2浓度在2.0 mmol/L时该酶催化活性最高,此浓度能最大限度地激活Taq DNA聚合酶的活性,Mg2+过高就抑制酶活性,因而MgCl2的浓度在不同的反应体系中应适当调整,优化浓度。Taq DNA聚合酶具有5′→3′聚合酶活性和5′→3′外切酶活性,而无3′→5′外切酶活性,它不具有校对活性。因而在PCR中如发生某些碱基的错配,该酶是没有校正功能的。Taq DNA聚合酶的碱基错配几率为2.1×10-4

(1)Taq DNA聚合酶在高温下仍保持活性,因此在PCR扩增时可以________加入,________(填“需要”或“不需要”)再添加。

(2)影响PCR反应的影响因素除引物、反应温度、时间和TaqDNA聚合酶浓度外,从材料中可知,还应有________。

(3)这种嗜热细菌能够在热泉中生存,这是________的结果。

(4)PCR中由碱基错配引起的变异属于________。假设对一个DNA进行扩增,第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配,则扩增若干次后检测所有DNA的扩增片段,与原DNA相应片段相同的占________。

 

 0  25663  25671  25677  25681  25687  25689  25693  25699  25701  25707  25713  25717  25719  25723  25729  25731  25737  25741  25743  25747  25749  25753  25755  25757  25758  25759  25761  25762  25763  25765  25767  25771  25773  25777  25779  25783  25789  25791  25797  25801  25803  25807  25813  25819  25821  25827  25831  25833  25839  25843  25849  25857  170175 

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