CTAB法是一种从高等真核生物细胞中制备基因组DNA(总DNA)的技术。CTAB能跟核酸形成复合物,在高盐溶液(>0.7mol/L的NaCl溶液)中可溶并且稳定存在,当降低溶液中盐的浓度(<0.3mol/L的 NaCl溶液),CTAB - 核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀,再用70% 酒精浸泡可洗脱掉CTAB;氯仿能使蛋白质发生变性而沉淀。提取和检测水稻基因组DNA的操作步骤如下:

① 在50ml离心管中加入20mlCTAB抽提缓冲液(主要成分是1.4mol/L 的NaCl、2%的CTAB),于65℃水浴中预热;

②将20 g新鲜的水稻幼嫩叶片剪成小段后放于研钵中,用液氮速冻并研磨成粉末,加入上述离心管中,于65℃水浴中保温30min;

③ 取出离心管中,冷却至室温,加入20mL的氯仿,轻轻混匀20min;

④ 在室温下以 12000r/min的转速离心10-20 min;

⑤ 将上清液移入另一个离心管中,加入2/3体积的经冷却的异丙醇,用玻璃棒轻轻搅动,

小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB - 核酸的复合物沉淀;

⑥ 将沉淀移入另一个离心管中,加入70%乙醇洗涤,重复洗涤1-2次;

⑦ 吹干乙醇后,将DNA溶于适量的TE缓冲液中,在0.8%的琼脂糖凝胶上电泳分离并在核酸紫外检测仪上观察。

请回答下列问题:

(1)植物基因组DNA(总DNA)的提取通常采用机械研磨的方法,常温下研磨时,植物细胞匀浆含有多种酶类对DNA的提取产生不利的影响。用液氮速冻,材料在研磨时易于破碎,同时还具有________________________________的作用。

(2)实验步骤③ 、④的目的是____________________。

(3)实验步骤⑤中,玻璃棒上出现沉淀的主要原因是________________________________________。

(4)对DNA进行定性检测常用的试剂是_____。琼脂糖凝胶电泳是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及__________、__________,使带电分子产生__________而实现分离。DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,利用核酸紫外检测仪可以进行__________。

 0  18743  18751  18757  18761  18767  18769  18773  18779  18781  18787  18793  18797  18799  18803  18809  18811  18817  18821  18823  18827  18829  18833  18835  18837  18838  18839  18841  18842  18843  18845  18847  18851  18853  18857  18859  18863  18869  18871  18877  18881  18883  18887  18893  18899  18901  18907  18911  18913  18919  18923  18929  18937  170175 

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