【题目】是基因工程中常用的质粒运载体,其结构如图(其中HindⅢPstⅠEcoRⅠ等限制酶的识别位点之间的碱基对数忽略不计,lacZ是显色基因)。

现将扩增的含目的基因的外源DNA片段与pUC18质粒都用PstI进行酶切,然后用DNA连接酶进行连接,构建重组质粒.为筛选非重组子和重组子,分别用不同的限制酶进行酶切.经琼脂糖凝胶电泳结果如图1(1kb=1000对碱基).请据图分析回答:

1)与pUC18质粒重组的目的基因大小为________

2)用kpnⅠ酶切pUC18质粒,产生了12.7kb的带;用kpnⅠ酶切重组质粒,产生了2条带,但有3.0kb+3.7kb1.0kb+5.7kb两组数据(图2).下列说法中合理的是________

A.重组质粒中有两个kpnⅠ的酶切位点,且其中一个位于目的基因的区段

B.重组质粒中有两个kpnⅠ的酶切位点,都位于目的基因的区段

C.产生两种酶切的结果,推测是目的基因与开环的pUC18拼接时有两种可能的插入方向

D.产生两种酶切的结果,推测是另有一种限制酶的酶切位点的碱基序列与kpnⅠ相同

3)请在目的基因上标注kpnⅠ酶切位点(需注明目的基因的碱基对数量及kpnⅠ酶切位点两侧的碱基对数量)_______

4)大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因,lacZ基因便可表达出β-半乳糖苷酶,当培养基中含有IPTGX-gal时,X-gal便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色,大肠杆菌将形成蓝色菌落.反之,则形成白色菌落.选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外,还应加________________________入物质。成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成________颜色的菌落,原因是________

【题目】研究发现,许多癌细胞表面会出现高亲和力的促性腺激素释放激素(LHRH)受体。某研究所构建了一种导向治疗癌症的药物﹣﹣重组人促性腺激素释放激素﹣绿脓杆菌外毒素A融合蛋白(LHRHPE40),目前已完成临床前研究。

1)促性腺激素释放激素(LHRH)由________分泌,与相关垂体细胞膜表面的________特异性结合并调节其细胞分泌促性腺激素,进而调节相关腺体的激素分泌,该过程体现了激素分泌的________调节。

2)绿脓杆菌外毒素APEA)是绿脓杆菌的主要毒力因子,它必须在进入细胞后才发挥毒性作用,杀死细胞。PEAPEA受体结合区、越膜区和毒性区三个功能区。LHRHPE40是利用基因工程的方法将LHRH基因和去除________区的所对应的基因片段在体外重组后,导入大肠杆菌表达产生的。

3)为了研究LHRHPE40与人结肠癌细胞膜蛋白特异性结合的最适加入量。科研人员用I标记的LHRHPE40和人结肠癌细胞膜蛋白进行结合实验。结果如下图所示。

注:﹣TBILHRHPE40与癌细胞膜蛋白的总结合量

NBILHRHPE40与癌细胞膜蛋白的非特异性结合量(非特异性结合是指激素结合到受体蛋白除特异性结合位点之外的其它部位)。

据图分析可知_LHRHPE40可作为其与人结肠癌细胞膜蛋白特异性结合的最适加入量是________CPM,作出此判断的依据是________

4)为了进一步验证:“LHRHPE40特异性结合的对象为LHRH受体”,科研人员以人结肠癌细胞膜蛋白作为实验材料,并先后添加相关药品进行实验。(注:药品AD均溶于E

AILHRH BLHRHPE40 CLHRH DLHRH受体 E.缓冲液

分组

先加药品

后加药品

测量指标

实验组

药品1

药品3

检测膜蛋白与药物结合后的放射性

对照组1

E

对照组2

药品2

①药品123分别是________________________(填字母)。

②若实验结果为___________________________________________,则证明“LHRHPE40特异性结合的对象为LHRH受体”的说法正确。

 0  169757  169765  169771  169775  169781  169783  169787  169793  169795  169801  169807  169811  169813  169817  169823  169825  169831  169835  169837  169841  169843  169847  169849  169851  169852  169853  169855  169856  169857  169859  169861  169865  169867  169871  169873  169877  169883  169885  169891  169895  169897  169901  169907  169913  169915  169921  169925  169927  169933  169937  169943  169951  170175 

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