【题目】凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶,直接利用动、植物生产凝乳酶受多种因素限制,培育高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向。用紫外线照射芽孢杆菌,分离、培养,并检测各菌株所产生的凝乳酶活力,操作过程如图所示。请分析回答:

1)图所示紫外线照射的原理是________,接种用的平板培养基________(是、不是)选择培养基。

2)在一定温度下(35℃),一定时间内(通常为40分钟),凝固1mL10%脱脂奶粉的酶量为一个酶活力单位(U),凝乳酶活力检测结果如图2所示。

①据图所示,酶催化能力最强的是________组。

A2A5组酶活力单位与A0组芽孢杆菌相同,两位同学对此做出了推测。

同学甲:A2A5组芽孢杆菌未发生基因突变,因为基因突变具有________的特点。

同学乙:A2A5组芽孢杆菌发生基因突变,但凝乳酶蛋白未改变,其依据的理由是________________。为了验证上述2位同学的假设,可采用________________技术检测凝乳酶基因是否发生了突变。

3)从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用,研究人员运用基因工程技术,将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。

①从牛胃细胞中提取________________,再反转录形成cDNA。以此cDNA为模板PCR扩增目的基因,有时需要在引物的起始端设计________(限制酶、DNA连接酶、RNA聚合酶)识别序列,以便构建重组DNA分子。

②构建重组DNA分子(如图所示)最好选用________________限制酶(填酶的名称),理由是________________

③工业化生产过程中,最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶,现多采用重组毛霉生产,毛霉作为受体细胞的优势是___________________________________________________________________

④研究发现,如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸,其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程生产高效凝乳酶,所需步骤依次有________

a.蛋白质的结构设计

b.蛋白质的结构和功能分析

c.蛋白质结构的定向改造

d.凝乳酶基因的定向改造

e.将改造后的凝乳酶基因导入受体细胞

f.将定向改造的凝乳酶导入受体细胞

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