【题目】玉米自交系（遗传稳定的育种材料）B具有高产、抗病等优良性状，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需依次进行步骤Ⅰ、Ⅱ试验。
Ⅰ、获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如图。
（1）为防止酶切产物____________________，构建基因表达载体需用2种限制酶。
（2）下表是4种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果。据表可知，细胞脱分化时使用的激素是__________，自交系__________的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体。
激素 结果 自交系 | 2，4-D（2.0mg/L） | 6-BA（0.5mg/L） | IBA（2.0mg/L） |
愈伤组织形成率（%） | 芽的分化率（%） | 根的诱导率（%） | |
甲 | 99 | 13 | 90 |
乙 | 85 | 80 | 87 |
丙 | 88 | 83 | 12 |
丁 | 16 | 85 | 83 |
（3）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选转化的愈伤组织，需使用含____________________的选择培养基。
（4）转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化的愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K分别处理以下愈伤组织，出现蓝色的是____________________和_________________________。
（5）组织培养获得的转基因植株（核DNA中仅插入一个G基因）进行自交，在子代含G基因的植株中，纯合子占__________。继续筛选，最终选育出抗除草剂纯合自交系A。
Ⅱ．通过回交使自交系B获得抗除草剂性状
（6）抗除草剂自交系A（GG）与自交系B杂交产生F1，然后进行多轮回交（下图）。自交系B作为亲本多次回交的目的是使后代积累越来越多______________________。
（7）假设子代生活力一致，上图育种过程H3代中含G基因植株的比例是__________，若回交后每代不进行鉴定筛选，直接回交，H3代中含G基因植株的比例是__________。
（8）下表是鉴定含G基因植株的4种方法。请预测同一后代群体中，4种方法检出的含基因植株的比例最小的是__________。
方法 | 检测对象 | 检测目标 | 检出的含G基因植株的比例 |
PCR扩增 | 基因组DNA | G基因 | x1 |
分子杂交 | 总mRNA | G基因转录产物 | x2 |
抗原-抗体杂交 | 总蛋白质 | G基因编码的蛋白质 | x3 |
喷洒除草剂 | 幼苗 | 抗除草剂幼苗 | x4 |
（9）利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
①第__________轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。
②在PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为____________________________。
（10）对Hn继续筛选，最终选育出高产、抗病、抗除草剂等优良性状的玉米自交系。
