【题目】骨缺损治疗是临床工作的一大挑战。骨髓间充质干细胞常用于骨和软骨的再生,但不适合长期培养。科学家基于CRISPR/Cas9同源定向修复(HDR)机制,将永生化癌基因SV40T靶向整合到小鼠Rosa26基因座,建立了永生化的BMSC,使用腺病毒载体转染BMP-9后可以有效地诱导异位成骨。HDR机制的原理是:用单个具有引导作用的sgRNA引导Cas9核酸酶对DNA进行定点切割(图1),DNA双链发生断裂后,在同源模板DNA存在时,通过HDR途径,根据模板供体DNA序列在预定位点精确整合DNA序列(图2)。回答下列问题:

1sgRNA之所以能引导Cas9核酸酶对DNA进行定点切割,是因为其序列能与小鼠DNA特定位点(靶位点)进行____________。据此分析,需确定靶位点序列在基因组中唯一性的原因是___________________________

2)运用CRISPR/Cas9系统时,可将sgRNACas9mRNA元件导入小鼠的受精卵,使用的方法是____________。还可通过腺病毒将CRISPR系统运送到细胞内,腺病毒能够感染分裂和非分裂细胞,且不会将其DNA整合到宿主细胞基因组中,为基因治疗设计的腺病毒应具备的特点是_______________________(至少答出两点)。

3)可提取小鼠的基因组DNA作为模板,利用PCR技术检测SV40T基因是否成功整合到小鼠Rosa26基因座中。利用PCR技术扩增目的基因时应使用____________种引物,需要合成引物的原因是__________________

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