【题目】诺如病毒是一种单链RNA 病毒,可引起流行性急性肠胃炎的重要病原体。诺如病毒衣壳P蛋白上含有抗原位点和受体识别位点,在体外可单独表达,被用于疫苗的免疫实验研究。
(1)人体感染诺如病毒后,会引发_______免疫,在康复者血清中能够检测到_________(物质)。有研究表明感染后第 180 天记忆B细胞仍具有持久性,说明这些细胞对机体具有___________作用。
(2)研究人员希望借P蛋白治疗由β蛋白沉积导致的阿尔茨海默症,选取β蛋白作为免疫原,利用诺如病毒P颗粒作为疫苗载体,研究其免疫原性。研究人员将β蛋白基因插入P蛋白基因的恰当位置,制备了重组P蛋白基因P-β(1780bp)后,采用双酶切方法,通过NdeⅠ和XhoⅠ酶和pET载体质粒(5230bp)构建重组质粒pET-P-β,如图1。对照组应选用___________。
①诺如病毒RNA ②P蛋白基因与pET载体质粒构建的重组质粒pET-P ③pET载体质粒
(3)为了鉴定重组质粒pET-P-β是否构建成功,NdeⅠ和XhoⅠ酶分别对重组质粒pET-P-β和pET载体质粒进行酶切,然后酶切片段和重组P蛋白基因进行电泳,请将你判断的电泳结果画到表中对应的泳道上。
7000bp 4000bp 1000bp | |||
DNA标记 | P-β | pET | pET-P-β |
_______
(4)想要获得目的蛋白,需要将构建的重组质粒pET-P-β、pET-P和pET分别转入用________处理的成为感受态的大肠杆菌细胞,培养处理后提取蛋白质。过程如下:
若干健康小鼠随机分为3组,将提取的蛋白质分别溶于PBS缓冲液,对小鼠进行皮下免疫,并对4次免疫后的血清进行不同梯度稀释,用__________(β蛋白/P蛋白)作为抗原,通过免疫法检测重组P-β蛋白的免疫原性。如图2所示,请据图描述出能够表明P-β蛋白可以在小鼠体内引起免疫反应,具有特异的免疫原性的实验结果____________。