【题目】1表示含有目的基因DDNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、Sma4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGGG↓GATCC↓GATCCCC↓GGG。请回答下列问题:

1)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1DNA片段,其产物长度为_________________

2)若图1中虚线方框内的碱基对被TA碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,产物中共有_________种不同DNA片段。为了提高实验成功率,需要通过___________技术扩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝,该技术原理为__________________

3)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是__________。在导入重组质粒后,为了筛选出含质粒的大肠杆菌,一般需要用添加________的培养基进行培养,想进一步筛选出含重组质粒的受体细胞,还需要接种到含_____________的培养基中培养。

4)假设用BamHⅠ切割DNA获取目的基因,用MboⅠ切割质粒,然后形成重组质粒,若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来,能否再次用BamH_________(填:可以、不可以、不一定),原因是:________________________________________

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