【题目】人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓,是心梗和脑血栓的急救药。然而,为心梗患者注射大剂量的基因工程t- PA会诱发颅内出血,其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实,将t-PA84位的半胱氨酸换成丝氨酸,能显著降低出血副作用。据此,先对天然的t-PA基因进行序列改造,然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因,可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。(注:下图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒,新霉素为抗生素。)

请回答下列问题:

1)以上制造出性能优异的改良t-PA蛋白的过程被称为____________工程。

2)已知人t-PA基因序列已测出,且第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA,而丝氨酸的模板链碱基序列为AGA,因此要获得改造后的目的基因最好采用 _____________法获得。

3)若t-PA改良基因的黏性末端如图所示,那么需选用限制酶XmaI _________切开质粒pCLY11,才能与t PA改良基因高效连接。在基因工程中,最核心的一步为_______________________

4)一般选择在未加入新霉素的培养基中生存的大肠杆菌作为受体细胞,目的是_____。在加入新霉索的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株,原因是_____________,这时需选择呈_____________色的菌落,进步培养 、检测和鉴定,以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。

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