【题目】将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗,饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。请根据以下图表回答下列问题。
限制酶 | Alu | EcoRI | PstI | SmaI |
切割位点 | AG↓CT | G↓AATTC | CTGCA↓G | CCC↓GGG |
TC↑GA | CTTAA↑G | G↑ACGTC | GGG↑CCC |
(1)一个图1中所示的质粒S经EcoRI和SmaI切割后,形成的片段最多含有______个游离的磷酸基团。若对图1中的质粒S进行改造,插入的SmaI酶切位点越多,则质粒的热稳定性越______。
(2)在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中,使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶,其最主要的特点是__________________________。
(3)PCR过程中设计一对与含有抗原基因DNA片段两端序列互补配对的引物(引物1和引物2称为引物对),为方便构建重组质粒,在引物中需要增加适当的______位点。设计引物时需要避免引物之间形成__________而造成引物1与引物2相结合。
(4)重组质粒T(基因表达载体)的组成有:目的基因、启动子、___________、___________、复制原点,启动子的作用是____________。外源基因进入马铃薯细胞内并且维持稳定和表达的过程称为_______________。
(5)对符合设计要求的重组质粒T进行酶切,假设所用的酶均可将识别位点完全切开,根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列,如果采用EcoRⅠ、AluⅠ和PstⅠ酶切,会得到_________种DNA片段。
(6)抗原基因能否在马铃薯体内稳定维持和表达的关键是_____________,这需要通过检测才能知道,检测采用的方法是____________________________。