【题目】下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。
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(1)一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割后,含有_________个游离的磷酸基团。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用SmaⅠ切割,原因是_____________________。
(2)与只使用EcoR I相比较,使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于________________________________________________。
(3)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因,将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体,然后在_______________的培养基中培养,以完成目的基因表达的初步检测。
(4)下列有关限制酶的叙述正确的是__________________。
A.从反应类型来看,限制酶催化的是一种水解反应
B.限制酶的活性受温度、pH的影响
C.一种限制酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列
D.限制酶识别序列越短,则该序列在DNA中出现的几率就越小
若用限制酶A、B单独或联合切割一个5000bp(bp为碱基对)大小的线状DNA分子,相关实验及数据如下表。
第一步水解 | 产物(bp) | 第二步水解 | 产物(bp) | |
实验1 | A酶切割 | 2100 | 将第一步水解产物分离后,分别用B酶切割 | 200、1900 |
1400 | 600、800 | |||
1000 | 1000 | |||
500 | 500 | |||
实验2 | B酶切割 | 2500 | 将第一步水解产物分离后,分别用A酶切割 | 1900、600 |
1300 | 800、500 | |||
1200 | 1000、200 | |||
实验3 | A酶、B酶同时切割 | 1900、1000、800、600、500、200 | ||
(5)由单酶剪切的片段数可知,A酶和B酶的酶切位点分别为_______个和_______个。
(6)综合实验数据的分析,在下图中绘制出实验3的酶切图谱。
_______________
(每小格代表100bp)