【题目】对棉纤维基因GhRACK1的正常启动子P进行改造,获得了P1、P2、P3、P4缺失体。科研人员对正常启动子P及其4种缺失体(P1﹣P4)进行了实验研究。
(1)首先利用PCR技术扩增正常启动子P,方法如图1。
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①不能直接根据片段Ⅰ扩增出正常启动子P,因为__。
②利用__酶处理使片段Ⅰ成为环状DNA。
③将环状DNA用__酶处理,得到片段Ⅱ.欲扩增出正常启动子P,需选用的引物组合为__。
(2)利用有关酶对正常启动子P进行切割,得到不同程度缺失体(P1﹣P4),图2表示正常启动子P缺失示意图。
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(3)利用正常启动子P及其4种缺失体(P1﹣P4)分别构建了基因表达盒,如图3所示。
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(4)再将5种基因表达盒分别转入相同质粒,构建相应的植物表达载体。然后将其导入农杆菌,最后导入烟草细胞中。用含有__的培养基对烟草细胞进行筛选,分别获得了含有正常启动子P及其4种缺失体(P1﹣P4)的转基因烟草。将植物组织浸入适量__溶液中,观察烟草细胞gus基因是否表达,实验结果如下表。
根 | 叶 | 花粉 | |
正常启动子P | 幼根+根毛+ | ﹣ | ﹣ |
P1 | + | + | + |
P2 | + | + | + |
P3 | + | + | + |
P4 | + | + | + |
有蓝色:+ 无蓝色:﹣
如果烟草细胞gus基因成功表达,则细胞呈现蓝色.实验结果表明__。
与P1﹣P4的实验结果相比,说明正常启动子P发挥不同功能的关键序列位于图2的__。(填字母)