【题目】海洋石油污染正引起光泛关注。利用基因工程菌进行生物降解具有巨大的应用潜力。P450是石油降解的关键酶，用Sal I和NdeI联合酶切获得的P450基因，与甲图所示的质粒pCom8重组，导入土著石油降解菌种Y9，获得了基因工程菌中mel是黑色素合成基因，其表达能使白色的菌落变成黑色，aacCl是庆大霉素（一种抗生素）抗性基因，限制酶NdeI、XhoI和SspI在原质粒上均只有一个酶切位点，数字表示酶切位点间的碱基对数，乙图表示几种限制酶的识别序列和切割位点。
(1)构建重组质粒时，需要使用限制酶和_____酶。图乙所示的几种限制酶中，切割目的基因产生平末端的是_______。
(2)质粒pCom8需用限制酶_____作用后，才能与P450基因形成重组质粒：为了便于重组质粒的导入，常使用_____处理Y9细胞，使其成为感受态细胞。若对重组质粒再次使用上述限制酶切制，可获得_____个DNA片段。
(3)经测定原质粒为7.6kb(1kb为1000个碱基对)，重组质粒经NdeI.SspI联合酶切后获得了6.0kb和1.2kb的两个片段，则目的基因的长度为______kb。
(4)由于重组质粒导入受体细胞的成功率很低，所以需要经过筛选才能获得工程菌。操作的大致思路是：
第一步，配制培养基。除下表中的成分外，还必须添加琼脂和_____。
蛋白胨 | 酵母侵膏 | NaCl | KCl | MgCl2 | H2O | pH |
20g | 5.0g | 0.5g | 0.2g | 1.0g | 1000ml | 7.0 |
第二步，将待检菌液接种在第一步配制的培养基上。
第三步，选择_____色菌落扩大培养即可获得所需的工程菌。
