【题目】基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列,图2表示目的基因及限制酶切点,图3表示目的基因上的DNA片段,图4表示质粒。请回答下列问题:

1)若用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA,就其特异性而言,切开的是________________________________之间相连的化学键。

2)图3为目的基因中的某一片段,下列有关叙述正确的是____

A.若图中的ACT能决定一个氨基酸,则ACT可称为一个密码子

BDNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处,解旋酶作用于①处

C.若只用这个片段中的3个碱基对,排列出的DNA片段有64

D.就游离的磷酸基而言,该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基

3)若利用PCR技术增扩目的基因的数量,由图2可知,ABCD四种单链DNA片段中应选取_____________作为引物(DNA复制子链的延伸方向5’→3’)。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生等长的目的基因片段______个。

4)为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选,提高重组效率,应该选择的限制酶是____________。如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割,假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等,则形成含有完整抗四环素基因的DNA片段有________种。

5)如果大肠杆菌是受体细胞,则其体内应不含_________________基因,以利于筛选出含重组质粒的受体菌。

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