【题目】抗菌肽具有热稳定性以及广谱抗细菌等特点,其广泛的生物学活性显示了在医学上良好的应用前景。科研工作者将若干编码抗菌肽(ABP)序列按照首尾相连的方式插在质粒PLG339的布康唑抗性基因内部,形成长度为4800bp(1bp为一个碱基对)的重组质粒PLG339-nABP,相关过程如图所示。已知重组质粒中,每个编码ABP序列中都含有限制酶AccⅢ的一个切点,基因trpA的表达产物可使细胞利用无机氮源合成色氨酸(色氨酸是微生物生长必须的氨基酸)。请据图回答下列问题:

(1)质粒PLG339的基本单位是______

(2)若PLG339-nABP经限制酶AccⅢ处理后,产生66bp和4140bp两种长度的DNA片段,单个抗菌肽(ABP)最多由______个氨基酸构成(不考虑终止密码)。

(3)现有大肠杆菌和酵母菌两种菌群,可作为导入PLG339-nABP的受体细胞是______,理由是______

(4)若选定的受体细胞为trpA基因缺陷型,则需采用两步法筛选含重组质粒的细胞。第一步筛选的固体培养基在营养成分上的要求是:______,不含色氨酸;第二步采用“影印法”,将第一步所得菌落转移到新的培养基上进行培养,该培养基中应添加______。通过对照,最终选出能在第一步培养基上生长,而不能在第二步培养基上生长的菌落即为符合要求的成功导入重组质粒的细胞。

(5)在测试转基因表达产物ABP对金黄色葡萄球菌的杀菌效果时获得了如图所示的结果,据此可获得的结论是:ABP抑菌效果与ABP的______和金黄色葡萄球菌的______有关。

【题目】CRISPR/Cas系统是一种原核生物的免疫系统,用来抵抗外源遗传物质的入侵,当细菌遭受病毒或者外源质粒入侵时,会产生相应的“记忆”,从而可以抵抗它们的再次入侵。CRISPR/Cas系统作用机理如图一所示,图一中的CRISPR位点结构如图二所示,过程③作用如图三所示。请据图回答问题:

(1)图一中,新CRISPR序列中a间隔区的来源是______,图二中CRISPR序列上游的前导区中含有______,以保证CRISPR序列转录的正常进行。

(2)图一中,过程①需要______酶的参与,过程②需要的原料有______

(3)图三中,向导RNA上的识别序列存在于______(填“tracrRNA”或“crRNA”)上。若α链剪切点附近序列为……TCCACAATC……,则向导RNA相应的识别序列为______。由此推测,tracrRNA、crRNA和Cas9蛋白组装的系统类似于基因工程中的______酶。

(4)原核生物通过CRISPR/Cas系统抵抗外源遗传物质的入侵类似哺乳动物的______(填“初次”或“二次”)免疫。

(5)一对名为露露和娜娜的基因编辑婴儿于2018年11月在中国健康诞生。这对双胞胎的一个CCR5基因经过CRISPR/Cas9敲除,使她们出生后即能天然抵抗艾滋病。这是世界首例免疫艾滋病的基因婴儿,也意味着中国在基因编辑技术用于疾病预防领域实现历史性突破。但这项研究也引起了争议,下列属于该项研究争议的有______(多选)。

A.伦理上的担忧

B.CRISPR/Cas9基因编辑技术存在潜在脱靶效应

C.CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除CCR5基因后对其他基因的表达有可能存在影响

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