【题目】为生产具有特定性能的α-淀粉酶,研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因(1656个碱基对),利用基因工程大量制备琢α-淀粉酶,实验流程见下图。请回答下列问题:

(1)利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前,需先合成两条引物,并获得细菌的_______________________

(2)为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接,需在引物的____________________端加上限制性酶切位点,且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点,主要目的_________________________

(3)进行扩增时,反应的温度和时间需根据具体情况进行设定,下列选项中________的设定与引物有关,________的设定与扩增片段的长度有关。(填序号)

①加热至90~95℃(变性)

②冷却至55~60℃(复性)

③加热至70~75℃(延伸)

④90~95℃维持时间

⑤55~60℃维持时间

⑥70~75℃维持时间

(4)下图表示筛选获得的工程菌中编码α-淀粉酶的mRNA的部分碱基序列:

图中虚线框内mRNA片段包含________个密码子,如虚线框后的序列未知,预测虚线框后的第一个密码子最多有________种。

(5)获得工程菌表达的α-淀粉酶后,为探究影响酶活性的因素,以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性,结果如下:

缓冲液

50 mmol/LNa2HPO4-KH2PO4

50 mmol/LGly-NaOH

50 mmol/LTris-HCl

pH

6.0

6.5

7.0

7.5

7.5

8.0

8.5

9.0

9.0

9.5

10.0

10.5

酶相对活性%

25.4

40.2

49.8

63.2

70.1

99.5

95.5

85.3

68.1

63.7

41.5

20.8

根据上述实验结果,初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为___________________________

 0  164830  164838  164844  164848  164854  164856  164860  164866  164868  164874  164880  164884  164886  164890  164896  164898  164904  164908  164910  164914  164916  164920  164922  164924  164925  164926  164928  164929  164930  164932  164934  164938  164940  164944  164946  164950  164956  164958  164964  164968  164970  164974  164980  164986  164988  164994  164998  165000  165006  165010  165016  165024  170175 

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