【题目】Period2(Per2)基因是一种抑癌基因,干扰Per2基因表达有利于肿瘤细胞存活和促进肿瘤发生。p53肿瘤抑制因子是一个关键的转录因子,调节DNA修复、细胞周期、衰老凋亡等相关细胞途径,是抵抗癌症发病和进展的重要防御因子,并且是通过与癌蛋白MDM2负调控作用调节其功能。为探究裸鼠体内下调Per基因对人胶质瘤细胞U343细胞株中P53的可能调控机制,科研人员做了如下实验:

Ⅰ.裸鼠胶质瘤模型构建

(1)培养U343细胞常在培养基中加入____________,一段时间后用________________消化,制成细胞悬液。

(2)人工合成低表达Per2基因,以某种病毒作为运载体,构建重组DNA,导入到培养好的U343胶质瘤细胞中(实验组),同时还需要设置2组对照组,分别为:________________(对照组1)、空白对照组(U343)(对照组2)。

(3)每组等量同龄健康裸鼠,皮下相同部位分别对应注入上述组别的U343细胞,适宜条件下培养,定期记录瘤体体积,记录到成瘤(体积达1000mm3)的时间,处死小鼠,取出瘤体,提RNA和蛋白质。

II.实验结果

(4)实验组小鼠成瘤时间短于两对照组,且相同时间内实验组瘤体体积大于两对照组。

(5)检测各组U343胶质瘤细胞中Per2 蛋白含量(各组mRNA含量关系同Per2蛋白含量关系),如图1所示。

注:图中从左向右依次为实验组、对照组1、对照组2。

由图1结果可知,细胞中GAPDH蛋白表达量相对稳定,在实验中可作为参照,作用是____________________________。该实验结果说明实验组Per2基因低表达体系构建成功。

(6)已知当DNA损伤后,DNA检测点基因ATM被激活,随后诱发p53激活,而c-myc是原癌基因,p53可与c-myc的启动子相结合发生乙酰化反应,已知c-myc的转录,相关基因表达后蛋白检测如图2(各组mRNA含量关系同蛋白含量关系)

注:图中从左向右依次为实验组、对照组1、对照组2。

由图2可推测,Per2基因的作用为:____________________________________

III.下调Per基因对人胶质瘤细胞U343细胞株中P53的可能调控机制

(7)综上,Per2基因低表达可明显促进胶质瘤的发生发展,请你提出一种可能的调控机制:________________________________________________________,导致胶质瘤的发生和发展。

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