【题目】研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂一内皮抑素,它能有效地抑制血管增生。下面是获得重组内皮抑素的方法,请分析回答下列问题:

(1)从肝细胞中分离总RNA,经____________获得cDNA,之后经过____________扩增内皮抑素基因。

(2)扩增的目的基因与pUC18质粒(如下图所示)都用EcoRⅠ和BamHⅠ进行双酶切,然后用DNA连接酶进行连接,构建重组质粒。双酶切避免了目的基因与载体____________连接,还减少了____________的连接(答不全不给分),提高了重组质粒的比例。

(3)大肠杆菌pUC18质粒的lacZ基因中如果没有插入外源基因,lacZ基因便可表达出β-半乳糖苷酶,当培养基中含有IPTG和X-gal时,X-gal便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色,大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之,则形成白色菌落。

选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外,还应加入______物质。成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成_________颜色的菌落,原因是__________________。之所以选择大肠杆菌作为基因工程的受体菌,其突出的优点是:________________________。(至少答出两点)

(4)从选择培养基中挑取所需的单个菌落接种于液体培养基中培养,获得粗提表达产物。将等量毛细血管内皮细胞接种于细胞培养板,37℃培养。将等量____________的粗提表达产物加进培养孔中,72h后在显微镜下观察细胞存活情况并________________________,实验结果如下表所示。

粗提表达产物浓度(μg/mL)

0

2

4

6

8

10

活的内皮细胞数目(×lO2

12

6

2

1

0.5

0.5

实验结果说明________________________________________________

 0  155263  155271  155277  155281  155287  155289  155293  155299  155301  155307  155313  155317  155319  155323  155329  155331  155337  155341  155343  155347  155349  155353  155355  155357  155358  155359  155361  155362  155363  155365  155367  155371  155373  155377  155379  155383  155389  155391  155397  155401  155403  155407  155413  155419  155421  155427  155431  155433  155439  155443  155449  155457  170175 

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